Руководство воз по контролю качества питьевой воды, вышедшее в 2004 года, как и предыдущие издания, наивысший приоритет для принятия решений оставляет за результатами микробиологических исследований. icon

Руководство воз по контролю качества питьевой воды, вышедшее в 2004 года, как и предыдущие издания, наивысший приоритет для принятия решений оставляет за результатами микробиологических исследований.


Смотрите также:
Руководство по контролю качества питьевой воды...
Дезинфекция питьевой воды: проблемы и решения...
Программа дней качества Репутация и качество для нас наивысший приоритет долгосрочной...
«Изучение системы водоснабжения и качества питьевой воды в поселке Новосергиевка и...
Определение оптимальной экспозиции питьевой воды на красном свету методом биотестирования...
Урок. Тема. Вода. Качество питьевой воды. Очистка воды...
О создании Автоматизированной информационной системы «Государственный регистр бутилированных...
Портативный спектрофотометрический анализатор для аналитического контроля качества природной и...
Физические критерии качества питьевой воды...
Дезинфекциф питьевой воды: анализ и перспективы...
Общие положения теории принятия решений Глава Задачи принятия решений...
Курсовая работа на тему: «мозговой штурм как метод принятия коллективных решений»...



Загрузка...
скачать
ОПЫТ ПРИМЕНЕНИЯ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ЭКСПРЕСС-АНАЛИЗАТОРА БАКТРАК 4300 В КОНТРОЛЕ КАЧЕСТВА ВОДЫ

Кашкарова Г.П.

МГУП «Мосводоканал», Москва, Россия

Чепурная И.М.

МГУП «Мосводоканал», Москва, Россия


Введение

Руководство ВОЗ по контролю качества питьевой воды, вышедшее в 2004 года, как и предыдущие издания, наивысший приоритет для принятия решений оставляет за результатами микробиологических исследований. Вместе с тем действующие на сегодняшний день методы определения основных нормируемых бактериологических показателей (ОМЧ, ОКБ, ТКБ) позволяют получение результата в течение 1-3 суток[1]. В этой связи трудно переоценить интерес к появлению в начале 80-х годов прошедшего столетия приборов автоматического контроля для определения бактериологических показателей: Мальтус (Швейцария), Ребит (Великобритания), БакТрак (Австрия). Принцип действия этих приборов основан на методе импеданса, то есть регистрации изменения электрического сопротивления питательной среды в результате размножения микроорганизмов и появления продуктов их жизнедеятельности.

С 90-х в России в практике бактериологических исследований пищевых продуктов, а затем воды, получили распространение бактериологические австрийские экспресс-анализаторы серии БакТрак,прозводства фирмы Sy-Lab. В настоящее время в стране внедрено более 50 анализаторов. Приборы серии БакТрак получили официальный статус на российском рынке: введены в Государственный реестр средств измерения, налажена работа по организации поверки измерительных ячеек анализатора, имеется полный пакет разрешительных документов для практического применения.

В 1996 году вышли первые методический документ по применению БакТрак для исследования воды [2,3]. Официальный допуск бактериологическому анализатору БакТрак в контроль качества воды дали Методические указания МУ 2.1.4.682-97 по внедрению СанПиН на питьевую воду [4]. На сегодняшний день для санитарно-микробиологического исследования воды с использованием БакТрак действуют два документа: МУК 4.2.1111-02 и утвержденные в 2004 году методические рекомендации № ФЦ/4000, распространяющиеся на исследования объектов окружающей среды в целом, в том числе на исследования воды [5,6].

На основании изложенного изложенного в 1996 МГУП «Мосводоканал в рамках плана закупки экспериментального оборудования был приобретен экспресс-анализатор БакТрак 4300, последняя версия (БакТрак). Принимая во внимание производительность БакТрак 4300, область применения нового оборудования, приобретенного в качестве опытного образца, была ограничена выполнением бактериологического контроля после ремонта и пуска новых водопроводных сетей.

В задачу настоящих исследований входило освоение нового дорогостоящего оборудования, с целью обеспечения правильности его эксплуатации и получения объективных результатов.

Методы

Работ выполнялась в соответствии с утвержденными методическими документами и инструкцией производителя, прилагающейся к прибору. Использовались питательные среды фирмы-производителя. Оценка результата осуществлялась по М-параметру, характеризующего изменение импеданса среды, и времени импеданса, в течение которого кривая изменения импеданса, соответствующая росту микроорганизмов, достигает 5% М-параметра. В соответствии с методическими документами время импеданса обратно пропорционально исходному количеству искомых микроорганизмов, поэтому завершение анализов с разными исходным данными должно осуществляться в разное время. Наблюдение за ходом анализа проводилось по росту кривой импеданса, а также Бак Монитору, на который выведены все измерительные ячейки с цветовой маркировкой хода и результата анализа: черный - ячейка без пробы; красный – завершенный анализ, превышение норматива; зеленый - завершенный анализ, соответствие нормативу; серый с голубым сектором – незавершенный анализ; желтый с зеленным – сбой измерения.

Определяемые показатели: ОМЧ, ОКБ и ТКБ. Исследования проводились двумя параллельными методами: на БакТрак с использованием коммерческих колибровочных файлов, рекомендованных производителем, и классическим бактериологическим методом в соответствии с МУК 4.2.1018-01 (МУК).

Для получения количественных результатов и возможности проведения сравнительной оценки получаемых количественных характеристик исследования проводились как на питьевой воде, так и воде, отобранной на этапах водоподготовки, в процессе проведения различных экспериментов, а также воде водоисточников, разной степени загрязнения.

Результаты и обсуждение

Из 89 проб, исследованных на определение ОМЧ, числовые результаты получены в 38 случаях, в том числе: в 11-при определении двумя методами, в 23 – только по МУК, в 4 - только при использовании БакТрак. В 7 пробах из 38 результат превышал значение 10 КОЕ/мл, принятый в Мосводоканале как «уровень тревоги» (табл.1).. Результаты параллельных определений при этом отличались на 1-2 порядка, в том числе при получении одним из методов результата, превышающего действующий норматив – 50 КОЕ/мл. Следует отметить, что любое значение, отличное от нуля, на БакМониторе регистрировалось как нестандартное с окрашиванием соответствующей ячейки на БакМониторе в красный цвет.


Таблица 1. Результаты определения ОМЧ, полученные бактериологическим методом по МУК 4.2.1018-01 и на БакТрак 4300.

Методы

КОЕ/мл

БакТрак

25

0,78

0

70

13

120

10

МУК 4.2.1018-01

255

12

12

6

2

2

0



Полученные результаты теоретически логичны. Определение ОМЧ предполагает учет небольшой части существующих в воде микроорганизмов, растущих на конкретной плотной среде - питательном агаре, и охватывает широкий спектр таксономических групп, имеющих различные ростовые свойства. Состав и разнообразие микроорганизмов варьирует в зависимости от времени года и конкретного периода, например паводкового, особенностей водоисточника, в том числе его климатического расположения, и многих других фкторов. В этой связи, формирование колибровочного файла по 50 определениям [5,6], вряд ли может решить проблему количественного учета постоянного меняющихся разнообразных микроорганизмов, определяемых в составе ОМЧ, к тому же проведением анализа на иной, не предназначенной для определения ОМЧ, жидкой среде.

Проведенными исследованиями не выявлено четкой зависимости между временем завершения анализа ОМЧ и количеством определяемых микроорганизмов, которая представлялась как принципиальная основа количественного учета. Представленный на рис. 1 график свидетельствует лишь о тенденции связи времени определения и исходной численности микроорганизмов.




Рисунок 1. Тенденция связи времени определения ОМЧ от концентрации микроорганизмов


При определении ОМЧ с использованием БакТрак нам не удалось получить ожидаемого сокращения времени анализа, что представлялось основным преимуществом применения экспресс-анализатора.

На основании анализа полученных результатов было принято решение о нецелесообразности применения бактериологического анализатора для определения ОМЧ.

Для определения ОКБ МУК 4.2.1111-02 вводит дополнительный критерий - изменение цвета среды в ячейке. Однако, принимая во внимание, что предлагаемый принцип количественного учета заложен в регистрации изменения импеданса среды, учет изменения цвета среды входит в противоречие основному принципу.

При определении ОКБ были выявлены те же проблемы количественного учета, как и при ОМЧ.


Таблица 2. Проблемы количественного учета ОКБ при использовании БакТрак 4300

Методы

КОЕ/100мл

БакТрак

20000

59

54000

3500

24000

0,051

0,014

00029

0,0069

МУК 4.2.1018-01

Отс.

Отс.

Отс.

0,4

Отс.

Отс.

Отс.

0,4

Отс.



Так, при обнаружении единичных колиформ классическим методом по МУК БакТрак регистрировал ОКБ на уровне тысяч КОЕ/100 мл, не подтверждающиеся высевом из ячеек. Не находят логического обоснования регистрируемые анализатором значения на уровне десятитысячных долях КОЕ.


Таблица 3. Результаты параллельных исследований воды по МУК 4.2.1018-01 и с помощью экспресс-анализатора БакТрак 4300

1.Исследовано проб двумя методами,

обнаружены ОКБ

677

двумя методами

18

только по МУК

9

только БакТрак

56

2. Из проб с ОКБ только по БакТрак проведено подтверждение по МУК

44

Подвержены как ОКБ

24

3. Направлено на видовую идентификацию

15

Определены виды, относящиеся к ОКБ

3

Определены виды родов Aeromonas, Pseudomonas

12/

21%



В таблице 3 представлены результаты 677 исследованных на ОКБ двумя параллельными методами (МУК и Бактрак) проб воды. В 56 пробах анализатором регистрировались ОКБ при их отсутствии в параллельных исследованиях, проведенных по МУК. В исследованиях по МУК при отрицательном результате на БакТрак ОКБ выявлены в 9 пробах. Для подтверждения полученных результатов из 44 проб, в которых БакТрак регистрировал наличие ОКБ, был проведен высев из ячеек для постановки идентификационных тестов, в соответствии с МУК: наличие оксидазы, грампринадлежность, способность к ферментации лактозы. По результатам тестов на групповую принадлежность к колиформным бактериям в 24 случаях подтверждено наличие ОКБ. Для неподтвержденных по групповым тестам культур была проведена видовая идентификация с привлечением ЗАО «Роса». Из 15 направленных на идентификации культур для 12 была определена принадлежность к видам родов Аeromonas и Pseudomonas, не относящихся к колиформным бактериям, что составляет 21% от числа положительных результатов на ОКБ, полученных только на БакТрак

В экспериментах, проведенных с искусственным внесением в стерильную воду чистых культур микроорганизмов Аеroмonas hydrophila в концентрациях от 102 до 104 бактерильных клеток на 100 мл, установлено, что кривая роста импедансного сигнала пересекает 5% пороговое значение М- параметра. Таким образом, БакТрак регистрирует эти пробы как загрязненные «колиформами» и дает в таких случаях ложно положительные результаты. Следует отметить, что цвет среды при этом не менялся.

Предоставленный по нашему требованию фирмой SY-Lab методический документ по использованию БакТрак для исследования воды, являющийся разработкой фирмы (V7.16.1) свидетельствует о том, что австрийские специалисты также столкнулись с подобной проблемой. Разработчики признают, что хотя селективность среды 160 С для определения колиформ очень высокая, остается минимальный риск получения положительных результатов при отсутствии колиформ. При этом предлагается следующая трактовка полученных результатов: Если цвет среды остается неизменным (фиалковым), то импедансный сигнал индуцирован большим количеством «не колиформных бактерий». Такие результаты должны считаться негативными для колиформных бактерий, но все-таки подозрительными за счет наличия бактерий, близкородственно связанными с колиформами. По – нашему мнению, вряд ли столь неоднозначная трактовка получаемых результатов, допускающая вероятность наличия колиформ при выдаче отрицательного ответа, приемлема в решениях вопросов оценки качества питьевой воды по микробиологическим показателям. К тому же, предлагаемый подход входит в противоречие с принципом действия анализатора и количественного определения искомых микроорганизмов по нарастанию импедансного сигнала.

Следует отметить, что проблема дифференциальной диагностики колиформных бактерий от представителей родов Аeromonas и Pseudomonas является дано известна. Именно для исключения из учета аеромонад и псевдомонад при определении колиформных бактерий ( коли-индекса в России) в начале 70-х годов прошлого столетия был введен оксидазный тест. С этой же проблемой столкнулись разработчики питательных сред нового поколения - хромогенных сред, позволяющих одновременное определение E.coli и колиформных бактерий, различающихся по цвету колоний. Хромогенные среды не требуют проведения подтверждающих тестов, что позволяет сократить время получения результата до суток. В 2002 году в лабораториях Мосводоканала была проведена апробация хромогенных сред, предлагаемых зарубежными производителями на российском рынке. По результатам проведенных исследований основной причиной отказа от практического применения новых сред послужил рост на хромогенных средах псевдомонад и аеромонад, морфология колоний которых оказалась идентичной морфологии колиформных бактерий. В настоящее время Проектом стандарта ISO 9308 (часть4) 2007 года, подготовленного УК утверждению, эта проблема решена введением селективных добавок антибиотиков: ванкомидина и цефсолудина. На рынке питательных сред западные производители уже предлагают питательных хромогенные среды для одновременных бактериологических исследований E. Coli и колиформных бактерий на основе стандарта проекта стандарта ISO 9308 (часть4)

Использование БакТрак для определения ТКБ и E. Coli также оказалось не приемлемым.

Так, согласно МУК4.2.1111-02 определение ТКБ осуществляется путем пересева из ячейки с признаками роста ОКБ на среду Эндо и далее по МУК 4.2.1018-01, что дополнительно удлиняет анализ на сутки.

Рекомендации МР № ФЦ/4000 о возможности определение E. соli путем постановки теста на индол c реактивом Ковача из ячейки с признаками роста ОКБ оказались не правомерными: при наличии аеромонад, которые также образуют индол, регистрируется ложноположительный результат на присутствие E. соli.

В процессе работы с бактериологическим анализатором был выявлен целый ряд технических недостатков, основными из которых являются следующие.

Периодически возникают сбои в работе ячеек, причины которых не могут объяснить специалисты производителя. Проба при этом теряется.

Программное обеспечение БакТрак не позволяет подключение в лабораторную сеть с целью оперативного контроля за ходом анализа на других компьютерах..

В базе данных регистрируются и сохраняются результаты в виде 7,2Е+2 / 7,2Е-2, что требует ручной корректировки при обработке данных.

При требованиях регулярного контроля поддержания температуры в ячейках, термометр не водит в комплектацию к прибору, в то время как подбор термометра 10-15 мм длины с ценой деления 0,25-0,5º оказался проблематичным. Из-за некомплектного термометра контроль температуры, выполняемый с открытой ячейкой вряд ли можно считать достоверным.

Действующие методические документы содержат противоречивую информацию

Таким образом, на основании результатов проведенных исследований был сделан вывод, что бактериологических экспресс-анализатор БакТрак 4300 не соответствует заявленным характеристикам и не может быть использован в производственном контроле качества воды.

Выводы

БакТрак 4300 не позволяет дать количественную оценку содержания микроорганизмов при определении ОМЧ и колиформных бактерий в воде.

БакТрак 4300 может дать ложноположительные результаты, так как регистрирует рост микроорганизмов родов Аеromonas и Pseudomonas как колиформные бактерии.

БакТрак 4300 требует доработки как по сути, так и по техническим характеристикам, в связи с чем на сегодняшний день не может быть использован в рутинном контроле качества питьевой воды.

Действующие методические документы содержат противоречия и требуют пересмотра с учетом устранения проблем, возникающих в процессе работы на бактериологическом анализаторе.


^ СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. «Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды», Методические указания МУК 4.2.1018-01, М., 2001

2. Методические рекомендации по проведению бактерилогических исследований питьевой воды с использованием микробиологического экспресс-анализатора «БакТрак 4100», № 01.-19/82-23 от 22.05.96., М., 1996.

3. «Бактериологические исследования с использованием экспресс-анализатора «БакТрак 4100», Методические указания, МУК 4.2.-96, М., 1996.

4. Методические указания по внедрению и применению Санитарных правил СанПиН 2.1.4.559-96 «Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества». МУ 2.1.4.686-97., М.1998.

5. "Использование метода измерения электрического сопротивления (импеданса) для санитарно-микробиологического исследования питьевой воды", Методические указания МУК 4.2.1111-02 , М., 2002.

6. "Использование метода измерения электрического сопротивления (импеданса) для санитарно-микробиологического исследования объектов окружающей среды", Методические рекомендации № ФЦ/4000, М., 2005.




Скачать 108,1 Kb.
оставить комментарий
Дата15.10.2011
Размер108,1 Kb.
ТипРуководство, Образовательные материалы
Добавить документ в свой блог или на сайт

Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Разместите кнопку на своём сайте или блоге:
rudocs.exdat.com

Загрузка...
База данных защищена авторским правом ©exdat 2000-2017
При копировании материала укажите ссылку
обратиться к администрации
Анализ
Справочники
Сценарии
Рефераты
Курсовые работы
Авторефераты
Программы
Методички
Документы
Понятия

опубликовать
Загрузка...
Документы

наверх