Зухрабов Мирзабек Гашимович Ведущая организация. icon

Зухрабов Мирзабек Гашимович Ведущая организация.


страницы:   1   2   3   4

53







На правах рукописи


ЕРМОЛИНА сВЕТЛАНА АЛЕКСАНДРОВНА




ФАРМАКОКОРРЕКЦИЯ НИТРОКСИДЕРГИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ,

МОРФОБИОХИМИЧЕСКОГО И ИММУНОЛОГИЧЕСКОГО СТАТУСА

У ТЕЛЯТ ПРИ БРОНХОПНЕВМОНИИ И ДИСПЕПСИИ


06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией

06.02.01 – диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных


Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

доктора ветеринарных наук


^

Троицк – 2011


Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Вятская государственная сельскохозяйственная академия"




^ Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук,

профессор Лыкасова

Ирина Александровна


доктор ветеринарных наук,

профессор Уразаев

Дмитрий Николаевич


доктор ветеринарных наук,

профессор Зухрабов

Мирзабек Гашимович


^ Ведущая организация: Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородская государственная сельскохозяйственная академия"


Защита состоится "_____" ________________ 2011 г. в "_____" часов на заседании диссертационного совета Д.220.066.01 при ФГОУ ВПО "Уральская государственная академия ветеринарной медицины" по адресу: 457100, г. Троицк, Челябинской области, ул. Гагарина, 13, тел.: 8(351-63) 2-48-88; факс: 8(351-63) 2-04-72; E-mail: tvi_t@mail.ru, официальный сайт: www.usavm.ac.ru.


С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО "Уральская государственная академия ветеринарной медицины".


Автореферат разослан "_____" ________________ 2011 г.


Ученый секретарь

диссертационного совета Борисенко Е.В.

1. ^ ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Заболевания органов дыхания и пищеварения до настоящего времени являются самой частой патологией у молодняка животных, в частности у телят. Несмотря на достижения в вопросах диагностики и лечения патологии этих органов, имеются объективные сложности в определении патогенеза, проведении дифференциального диагноза и в подходах к их фармакокоррекции.

В последние годы большое внимание уделяется оксиду азота, которому приписываются многогранные свойства: вазодилятаторное действие, участие в неспецифической защите организма против бактерий, вирусов, раковых клеток, регуляции тонуса и просвета дыхательных путей, антиоксидантные свойства и др. (K. Hishika-wa, 1992; R. Hanano, 1998).

Известно, что при чрезмерной выработке оксид азота может проявлять цитотоксический эффект, что объясняется способностью образования в организме комплекса оксида азота с супероксидным анионом. В результате происходит реакция нитрирования и окисления многих структурных и ферментных белков, наблюдается их деструкция, усиливаются процессы свободнорадикального перекисного окисления (Х.М. Марков, 1996; К.С. Раевский, 1997; А.Ф. Ванин, 1998; А.К. Урзаев с соавт., 1999; А.А. Сосунов, 2000; D.S. Bredt et al., 1992; M. Keipes, 1995; О.З. Нагашян с соавт., 1991; И.С. Северина, 1998; А.Ф. Ванин, 2000; Л.И. Ратникова с соавт., 2002; М.В. Степаненко с соавт., 2001; Н.М. Сухов, 2002; И.А. Пахмутов с соавт., 2003; S. Moncada et al., 1993; M. Phillippo et al., 1997 и др.).

Представлено значительное количество работ по особенностям функционирования гомеостаза, состояния иммунной системы, характеристике изменений ПОЛ, белкового, углеводного, солевого и других обменов у больных с респираторными и желудочно-кишечными заболеваниями воспалительного генеза (И.М. Карпуть с соавт., 1974, 1989; В.А. Белопольский с соавт., 1993; Г.А. Ноздрин с соавт., 1997; А.Л. Аляви с соавт., 2002; И.П. Кондрахин, 1997; В.В. Митюшин, 1984; О.З. Нагашян с соавт., 1987, 1988, 1990, 1991; В.А.Томчук с соавт., 2003; М.И. Рецкий с соавт., 2004; К.Х. Папуниди с соавт., 2002; И.В. Сидоров с соавт., 2003 и др.).

При поступлении из очага воспаления токсинов, в организме накапливаются многие биологически активные метаболиты, в том числе и оксида азота, которые легко встраиваются в биомембранные структуры клеток, нарушая их функцию. Поэтому в настоящее время при различных патологических состояниях организма уделяют большое внимание синдрому эндогенной интоксикации, которая способствует повреждению барьерных систем и проникновению токсических веществ в межклеточную жидкость и клетки (М.Л. Уманский с соавт., 1979; Н.И. Габриэлян с соавт., 1985; М.Я. Малахова, 1995).

Традиционные методы лечения бронхопневмонии и диспепсии нередко мало эффективны, что приводит к удлинению сроков выздоровления, переходу острой формы болезни в хроническую. Мало изученными остаются вопросы о воздействии на обмен оксида азота основных групп лекарственных средств, особенно растительных (Х.М. Марков, 1996; И.Ю. Малышев с соавт., 2000). Включение в базисную терапию средств с антинитроксидергической направленностью, стимулирующих иммунную реактивность, обладающих отхаркивающими, вяжущими, противовоспалительными, спазмолитическими и другими свойствами может быть патогенетически обосновано.

В связи с этим научное обоснование возможности применения в ветеринарии препаратов из растительного сырья позволяет сократить расходы сельскохозяйственных предприятий на проведение лечения и профилактики заболеваний молодняка.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилась разработка способа фармакокоррекции нитроксидергических процессов, морфобиохимического и иммунологического статуса у телят при бронхопневмонии и диспепсии с различной степенью тяжести заболевания.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Установить физико-химические свойства препарата "Альгасол".

2. Определить его острую, хроническую токсичность и кумулятивные свойства.

3. Выявить эмбриотоксическое, тератогенное действие, и его влияние на постнатальное развитие.

4. Изучить местнораздражающее, аллергизирующее и сенсибилизирующее действие препарата.

5. Определить фармакологические свойства препарата "Альгасол".

6. Изучить общее действие его на организм телят.

7. Выяснить распространенность бронхопневмонии и диспепсии у телят в сельхозпредприятиях Кировской области.

8. Изучить микробиоциноз верхних дыхательных путей при бронхопневмонии и желудочно-кишечного тракта при диспепсии у телят.

9. Определить суммарное содержание метаболитов оксида азота в крови и моче у больных животных.

10. Установить взаимосвязь нитроксидемии с изменениями в морфо-биохимическом и иммунологическом статусе у телят, больных бронхопневмонией и диспепсией с различной степенью тяжести заболевания.

11. Дать комплексную оценку эффективности разных способов лечения бронхопневмонии и диспепсии телят.

Научная новизна результатов исследования. Впервые разработан препарат "Альгасол" на основе экстрактов морской бурой водоросли (Laminaria saccharina) и корня солодки (Glycyrrhiza glabra L.), показана возможность его использования в ветеринарной практике. В процессе доклинических исследований установлено, что препарат "Альгасол" является малотоксичным. Изучены его фармакологические свойства. Клинические испытания показали, что он обладает антиоксидантным, иммуномоделирующим действием, нормализует обменные процессы в организме.

Установлено, что у телят, больных бронхопневмонией и диспепсией неспецифической этиологии происходит интенсификация нитроксидергических процессов, причем прослеживается прямая зависимость содержания метаболитов эндогенного оксида азота в крови и моче от степени тяжести заболевания. В условиях нитроксидемии отмечаются существенные сдвиги, как в количественных, так и в качественных показателях крови; происходят изменения физико-химических свойств эритроцитарных мембран. Показано, что у больных телят нарастают процессы ПОЛ, образуются среднемолекулярные пептиды и снижается механизм АОА, что приводит к образованию токсических продуктов, их поступлению в кровь, развитию эндогенной интоксикации и изменению гомеостаза; развивается диспротеинемия; имеет место выраженная тенденция к снижению уровней содержания в крови глюкозы, холестерина и β-липопротеидов, возрастает активность ферментов ЛДГ, АсАТ и АлАТ. Установлено, что у больных телят в условиях нитроксидемии происходит снижение фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови; наблюдаются существенные изменения в лимфоцитарном звене иммунной системы, касающиеся снижения уровней Т- и В-лимфоцитов и их субпопуляций, JgM и JgG и возрастания циркулирующих иммунных комплексов; в крови отмечается снижение показателей БАСК.

Предложен способ лечения и профилактики желудочно-кишечных и легочных заболеваний у молодняка животных и птиц с использованием препарата "Альгасол" (Патент № 2407537 от 27.12.10 г).

Теоретическая и практическая значимость работы. Предложен препарат "Альгасол", обладающий антиоксидантным, иммуномоделирующим действием, нормализующим обменные процессы в организме. В установленном порядке утверждена инструкция по его применению (в Россельхознадзоре РФ), в Федеральной службе по ветеринарному и фитосанитарному контролю получено свидетельство о государственной регистрации лекарственного средства для животных (учетная серия 24-2-11.9-4296, регистрационный № ПВР-2-11.9/02525).

Разработан пакет нормативно-технической документации для его производства (ТУ 9337-001-60614688-2010), разработан технологический регламент на производство препарата "Альгасол". Выпуск препарата "Альгасол" организован на базе ООО "Инкрис-Гэйн" в г. Кирове.

Некоторые положения, вытекающие из материалов диссертационной работы используются в педагогическом процессе в 19 Федеральных государственных образовательных учреждениях высшего профессионального образования Российской Федерации, а также в Казахском национальном аграрном университете (при чтении лекций и проведении лабораторных и практических занятий) по курсу терапии (раздел "Болезни новорожденных животных") и по курсу фармакологии (раздел "Препараты растительного происхождения"), при подготовке студентов по специальности 111201 – "Ветеринария".

Результаты работы могут быть использованы при написании книг, учебников и монографий.

Соответствие диссертации паспорту научных специальностей. Содержание работы соответствует паспорту специальности 06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией по пунктам: п. 1 – механизм действия лекарственных веществ на организм животных, его отдельные системы и функции (фармакодинамика); п. 7 – теоретическое обоснование и разработка рецептур лекарственных веществ, обеспечивающих наибольшую эффективность при наименьших дозах и кратностях применения; п. 8 – токсичность лекарственных веществ для животных и характер их побочного действия, разработка показания и противопоказания для применения в ветеринарной практике, а также методов устранения побочных эффектов; п. 11 – изучение эмбриотоксического, тератогенного, мутагенного, аллергенного и канцерогенного действия лекарственных веществ и опасных химических загрязнений объектов ветеринарного надзора; паспорту специальности 06.02.01 – диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных по пунктам: п. 2 – вопросы клинической ветеринарии, принципы, методы и технологии обследования, общей, специальной и инструментальной диагностики болезней животных, частная синдроматика (кардио-, нейро-, гепато-, нефропатоголия, желудочно-кишечные, респираторные, репродуктивные расстройства); п. 3 – этиология, патогенез незаразных болезней, патологических и стрессовых состояний, патология обмена веществ у животных; п. 4 – принципы и методы общей и частной лекарственной, физиотерапии и профилактики незаразных болезней, научные основы диспансеризации продуктивных и мелких домашних животных.

Апробация работы и реализация результатов исследования. Результаты исследований были представлены на: IV международной научно-практической конференции "Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных", Троицк, 2001 г.; Международной конференции ветеринарных фармакологов и токсикологов, посвященной 125-летию Н.А. Сошественского", Казань, 2001; Всероссийской научно-практической конференции "Современные проблемы диагностики и лечение болезней животных", Киров, 2004; Международной научно-практической конференции "Повышение эффективности лечения и профилактики акушерско-гинекологических заболеваний и биотехники размножения животных", Киров, 2005; Международной научно-практической конференции, посвященной 90-летию Кабыша А.А., "Современные проблемы ветеринарной терапии и диагностики болезней животных", Троицк, 2007; научно-практической конференции фармакологов РФ, посвященной 85-летию Рабиновича М.И., "Фармакологические и экотоксикологические аспекты ветеринарной медицины" Троицк, 2007; научно-практической конференции "Вопросы физиологии, содержания, кормопроизводства и кормления, селекции с.-х. животных, биологии пушных зверей и птиц, охотоведения", Киров, 2008; Международной научно-практической конференции "Достижения ветеринарной науки и практики", Киров, 2008; Международной научно-практической конференции "Трансферт инновационных технологий в молочном скотоводстве", Орел, 2008; III Международной научно-практической конференции "Аграрная наука – сельскому хозяйству", Барнаул, 2008; Международной научно-практической конференции "Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях", Воронеж, 2008; Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 90-летию сельскохозяйственного образования на Урале "Инновационный потенциал аграрной науки – основа развития АПК", Пермь, 2008; Международной научно-практической конференции "Инновационные подходы в ветеринарии, биологии, экологии к здоровьесбережению в сельском хозяйстве", Троицк, 2008; Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 95-летию Х.В. Аюпова "Современные достижения ветеринарной медицины и биологии – в сельскохозяйственное производство", Уфа 2009; Международной научно-практической конференции "Проблемы и перспективы современной морфологии, ветеринарии, зоотехнии и охотоведения", Киров, 2009; Всероссийской научно-практической конференции "Аграрная наука – сельскому хозяйству", Курск, 2009; Всероссийской научно-практической дистанционной конференции "Современные достижения ветеринарной медицины сельскохозяйственному производству", Персиановка, 2009; II съезде ветеринарных фармакологов и токсикологов России "Современные проблемы ветеринарной фармакологии и токсикологии", Казань, 2009; Международной научно-практической конференции "Зоотехническая наука на Удмуртской земле. Состояние и перспективы", Ижевск, 2009; Международной научно-практической конференции "Инновационные подходы в ветеринарии, биологии и экологии", Троицк, 2009, 2010; Международной научно-практической конференции "Актуальные проблемы ветеринарной медицины", посвященной 90-летию МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, Москва, 2009; Х Сибирском ветеринарном конгрессе "Актуальные проблемы ветеринарной медицины", Новосибирск, 2010; Международной научно-практической конференции, посвященной 80-летию ВГСХА "Современные научно-практические достижения в ветеринарии", Киров, 2010; Международной научно-практической конференции "Ветеринарная медицина. Современные проблемы и перспективы развития", Саратов, 2010; Международной научно-практической конференции, посвященной 75-летию факультета ветеринарной медицины "Современные тенденции развития ветеринарной медицины и инновационные технологии в ветеринарии и животноводстве" – Улан-Удэ, 2010; Международной научно-практической конференции "Роль высшей школы в реализации проекта "Живое мышление – стратегия Чувашии" – Чебоксары, 2010.

Публикации результатов исследований. По теме диссертационной работы опубликовано 75 работ, из них 12 – в научных изданиях, определенных ВАК РФ; 2 монографии; патент РФ № 2407537 (от 27.12.10). Общий объем публикаций составляет 603 страницы или 37,7 печатных листов. Личный авторский вклад по публикациям 543 страницы (90%).

Основные положения, выносимые на защиту:

  • токсико-фармакологическая оценка препарата "Альгасол";

  • взаимосвязь нитроксидергических процессов с морфо-биохимическим и иммунологическим статусом у телят, больных бронхопневмонией и диспепсией различной степени тяжести;

  • терапевтическая эффективность комплексного лечения телят, больных бронхопневмонией и диспепсией в сочетании с препаратом "Альгасол".

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 272 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 63 таблицами и 17 диаграммами, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Список литературы включает 444 источника, из них 78 зарубежных авторов.

^ 2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материал и методы исследований

В работе обобщены результаты научных исследований, проводимых в период с 1990 по 2010 год. Экспериментальную часть работы выполняли на базе лабораторий ФГОУ ВПО "Вятская государственная сельскохозяйственная академия", Кировского НИИ гематологии, областной ветеринарной бактериологической лаборатории и диагностических центров городов Кирова и Челябинска, лаборатории ветеринарной иммунологии Кировского зонального НИИСХ Северо-Востока им. Рудницкого. Тема диссертационной работы утверждена на заседании Ученого совета ФГОУ ВПО "Вятская государственная сельскохозяйственная академия" 31 марта 2011 года (протокол № 3) и является разделом государственного плана научно-исследовательской работы академии (регистрационный № 01.200.206492).

Материалом для исследования служили препарат "Альгасол", цельная кровь, плазма и сыворотка крови, утренняя моча, а объектом наблюдения – лабораторные животные (белые мыши, крысы, морские свинки, кролики) и подопытные телята: клинически здоровые и больные различными формами бронхопневмонии и диспепсии.

Научно-производственные опыты проводили в ряде хозяйств Кировской и Челябинской областей, в частности в учхозе ФГОУ ВПО "ВГСХА", ЗАО племзавод "Красногорский", ЗАО Агрофирма "Дороничи", колхозе "Карсы" Челябинской области и других.

Таблица 1 – Схема опытов

№ п/п

Вид работ

Объем работы

1

Физико-химические свойства препарата Альгасол

25 проб

2

Токсикологическая оценка препарата Альгасол:

Острая токсичность (белые мыши)

Кумулятивные свойства (белые мыши)

Хроническая токсичность (белые крысы)




20 голов

20 голов

48 голов

3

Эмбриотоксическое и тератогенное действия (белые крысы)

Влияние на постнатальное развитие (белые крысы)

15 голов

10 голов

4

Изучение раздражающих свойств препарата Альгасол:

на слизистую оболочку глаза на белых крысах/кроликах

на слизистую оболочку желудка (белые крысы)




10/6 голов

20 голов

5

Изучение аллергизирующего и сенсибилизирующего действия препарата Альгасол: морские свинки/белые крысы




10/5 голов

6

Фармакологические свойства препарата Альгасол:

Определение адсорбирующих свойств

Изучение бактериостатической эффективности

Определение иммуномоделирующего действия (белые мыши)




5 проб

5 проб

25 голов

7

Изучение общего действия препарата Альгасол на организм телят

20 голов

8

Ретроспективный анализ данных ветеринарной отчетности по распространенности бронхопневмонии и диспепсии у телят в хозяйствах Кировской области

2003-2006 гг.

9

Изучение микробиоциноза верхних дыхательных путей при бронхо-пневмонии и желудочно-кишечного тракта при диспепсии у телят




20 голов

10

Изучение нитроксидергических процессов, морфобиохимического и иммунологического статуса у телят, больных бронхопневмонией и диспепсией







72 головы

11

Фармако-экспериментальное обоснование схем терапии телят больных: бронхопневмонией/диспепсией

110/110 голов

В соответствии с поставленными задачами на первом этапе наших исследований были изучены физико-химические свойства препарата "Альгасол" по стандартным методикам, в полном соответствии с указаниями, приведенными в части II "Общие методы физико-химического, химического и биологического исследования" Государственной Фармакопеи СССР (10 издание, 1964). Исследования проводили с учетом следующих показателей: плотность, рН, нелетучий остаток (зольность), массовая доля йода, массовая доля глицирризиновой кислоты.

Лабораторные, а также опытно-промышленные образцы препарата, отвечающие регламентированным показателям по физико-химическим характеристикам, использовали в дальнейшем для тестирования в научно-производственных опытах на лабораторных и сельскохозяйственных животных в соответствии с установленными требованиями.

Первичное фармакологическое и токсикологическое исследование препарата "Альгасол" проводили согласно "Требованиям к доклиническому изучению общетоксического действия новых фармакологических веществ" (1976), "Методическим указаниям по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве" (1991), а также с учетом имеющихся по этому вопросу других руководств (И.В. Саноцкий, 1965; И.А. Кассирский, Г.А. Алексеев, 1970; В.Я. Антонова, П.Н. Блинова, 1971; К.К. Сидоров, 1973; В.В. Гацура, 1974; И.П. Западнюк, Е.А. Захария 1974; И.В. Саноцкий, В.Н. Фоменко, 1979; И.П. Западнюк с соавт., 1983; А.Г. Малахов, С.И. Вишняков, 1984; Б.И. Антонов с соавт., 1989, 1991; В.В. Меньшиков с соавт., 1987; Б.И. Любимов, М.И. Миронова 1988; В.М. Холод, Г.Ф. Ермолов, 1988; Н.Б. Тарасова с соавт., 1996 и др.).

Изучение острой токсичности препарата "Альгасол" проводили по методу Кербера (М.Л. Беленький, 1963; О.Н. Елизарова, 1971; И.В. Саноцкий, В.Н. Фоменко, 1979) на белых мышах, при однократном пероральном введении с определением средней смертельной дозы (LD50). О токсическом действии препарата судили по клинической картине, количеству погибших животных и результатам патологоанатомического вскрытия (Б.И. Антонов с соавт., 1989).

Экспериментальное определение максимально переносимой дозы (LD0) препарата "Альгасол" осуществляли в диапазоне доз от 0,1 до 0,8 мл.

Выявление кумулятивных свойств препарата "Альгасол" проводили на белых мышах. В основу метода их выявления был взят тест субхронической токсичности (Лим с соавт. 1961). В опыте было использовано 20 животных.

Препарат животным вводили внутрь в подогретом виде (на водяной бане до температуры 37,5ºС) при помощи шприца и иглы с оливой в следующих дозах: первые 4 дня – 4 мл/кг массы тела (что составляло 1/10 от максимально переносимой дозы LD0), затем каждые последующие 4 дня дозу повышали в 1,5 раза. К концу опыта ежедневная доза составила – 40 мл/кг массы тела. Наблюдения за животными проводили в течение 28 дней. При этом учитывали: общее состояние, характер и степень активности, координацию движений, реакцию животных на ориентировку, тактильные и болевые раздражители, наличие тремора, судорог, параличей и других признаков.

Хроническую токсичность препарата "Альгасол" определяли на двух группах белых крыс, одна из которых была контрольной, другая – опытной. Каждая группа животных включала 12 самок и 12 самцов. Препарат вводили перорально в дозе – 1 мл/кг массы тела в нативном виде ежедневно в течение 3-х месяцев. Животным контрольной группы перорально вводили дистиллированную воду в том же объеме.

В течение всего экспериментального периода животные находились под ежедневным наблюдением, во время которого учитывали общее состояние, потребление корма и воды, состояние волосяного покрова и видимых слизистых оболочек, частоту дыхания. Предварительно до и че­рез 30, 60 и 90 дней после дачи препарата определяли массу животных и проводили анализ крови на содержание эритроцитов, гемоглобина, лейкоцитов, выводили лейкограмму. В конце периода наблюдения под легким эфирным наркозом из каждой группы умерщвляли (декапитацией) по 6 животных для проведения патоморфологических исследований (К.И. Вертинский с соавт., 1973). В сыворотке крови определяли общий белок, содержание глюкозы и изменения активности трансаминаз. Внутренние органы изолировали от окружающих тканей, взвешивали, вычисляли их относительную массу и в дальнейшем подвергали патоморфологическому исследованию.

Изучение эмбриотоксических и тератогенных свойств препарата "Альгасол" проводили согласно "Методическим указаниям по изучению эмбриотоксического действия фармакологических веществ и влияние их на репродуктивную функцию" (1986). Препарат вводили самкам белых крыс (10 голов) ежедневно внутрижелудочно в дозе 1/10 от LD0 – 4 мл/кг. Учитывали предымплантационную (1-13 сутки) и постимплантационную гибель плодов (с 14 по 20 сутки). Третья группа (5 голов) служила контролем. Животным этой группы вводили внутрь воду в том же объеме, что и препарат.

Родившиеся плоды взвешивали, определяли их кранио-каудальные размеры. После внешнего осмотра половину от числа взятых плодов фиксировали в жидкости Буэна для последующего изучения внутренних органов по методике Вильсона (Wilson), остальные заливали 96% этиловым спиртом для последующего изучения их скелета по методике Доусона (Dawson) (А.Т. Иванов с соавт., 1989).

Влияние препарата "Альгасол" на постнатальное развитие изучали на родившихся крысятах, матерям которых изучаемый препарат ежедневно вводили внутрижелудочно в дозе 1/10 от LD0 на протяжении всей беременности. За 1-2 дня до родов самок рассаживали по одной в клетки. Регистрировали день родов, число крысят в помете. В дальнейшем создали две группы животных – контрольную и опытную. Крысят распределяли по 8 на самку, для более равномерного вскармливания. Учитывали массу плодов (1 раз в неделю до пятимесячного возраста), а также показатели их общего развития – время обрастания шерстью, время открытия ушей и глаз, у самок – открытие вагины (В.В. Меньшиков с соавт., 1987).

Изучение раздражающих свойств препарата "Альгасол" на слизистую оболочку глаза проводили на лабораторных животных (крысах и кроликах) по методам В.В. Гацура (1974), Б.И. Любимова, М.И. Миронова (1988). В конъюнктивальный мешок правого глаза подопытным животным вносили 2 капли препарата, а в контроле – по 2 капли дистиллированной воды или изотонического раствора натрия хлорида.

Оценку раздражающего действия проводили через 1, 2, 3, 4 и 24 часа с учетом кровенаполнения сосудов конъюнктивы, наличия лакримации, состояния роговицы и век глаза.

Действие препарата "Альгасол" на слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки изучали на белых крысах (20 голов) при многократном (6 дней) оральном его введении, в дозе 1/10 от LD0 и пятикратно ее превышающей. Контрольным животным тем же путем и в том же объеме вводили дистиллированную воду. На 7 день крыс декапитировали под легким эфирным наркозом, у каждой из них вскрывали желудок и двенадцатиперстную кишку, проводили макроскопическое исследование их слизистых оболочек. Ульцерогенность оценивали по числу животных с язвами.

Аллергизирующее действие препарата "Альгасол" при нанесении на кожу изучали на 30 морских свинках. Белые участки кожного покрова депилировали (на площади 2х2 см) и в течение 20 суток наносили испытуемый препарат в дозе 1/10 от LD0. Через 21 сутки на интактный участок противоположной стороны наносили препарат в разрешающей дозе (LD0 – 4 мл/кг). В контрольной группе животных применяли вазелиновое масло в тех же объемах. В ходе опыта у животных учитывали изменения в живой массе, температуре тела, определяли степень покраснения кожи, а в крови – количество эритроцитов, лейкоцитов, выводили лейкоцитарную формулу. Для выявления аллергической реакции замедленного типа ставили РСАЛ в цитратной крови по Флексу. Положительной считали пробу, в которой агломерация лейкоцитов превышала контрольные данные не менее чем на 30% (Б.И. Любимов, М.И. Миронова, 1988).

Изучение сенсибилизирующего действия препарата "Альгасол" проводили на белых крысах путем 20 повторных накожных аппликаций (2 раза в неделю) на участок боковой поверхности туловища размером 2х2 см2.

Адсорбционную способность препарата "Альгасол" оценивали по изменению оптической плотности растворов метиленового синего. Метиленовый синий готовили в разведении: 1 мг (точная навеска) в 300 мл воды (0,00033%) по ГФ Х (с. 423). К 10 мл 0,00033% раствора метиленового синего добавляли 1 мл исследуемого препарата, тщательно перемешивали и центрифугировали при 2000 об./мин., в течение 15-20 минут. Определяли оптическую плотность исходного раствора красителя и центрифугата против воды на фотоэлектроколориметре при длине волны 670 нм в толщине слоя 10 мм. Определение повторяли трижды.

Определение бактериостатической активности препарата "Альгасол" производили методом серийных разведений в жидкой питательной среде (МПБ) и методом разведений в плотной питательной среде (МПА) на культурах: E. coli в концентрации (1 млн. микробных тел на 1 см3).

Влияние препарата "Альгасол" на иммунную систему оценивали по реакции лимфатических фолликулов селезенки у белых мышей. С этой целью были проведены две серии опытов на 20 мышах (самцах) массой 18-20 г. В первой серии изучали влияние препарата "Альгасол" на площадь лимфатических фолликулов селезенки у мышей после 7-суточного скармливания препарата. Во второй серии опытов оценивали влияние препарата "Альгасол" на лимфатические фолликулы в селезенке мышей с депрессией иммунной системы.

В первой серии опытов мыши экспериментальной группы получали с кормом по 0,02 мл препарата в течение недели. Контрольные животные получали такой же корм, но без препарата. На 8 сутки животных убивали, селезенки отпрепарировали. Кусочки селезенок после глубокого замораживания резали в криостате. Гистологические срезы окрашивали по Бранше на РНК (Э. Пирс, 1962). В гистологических срезах селезенок с помощью микроскопа измеряли площадь лимфоидных узелков (фолликулов).

Во второй серии опытов все животные, кроме контрольных, получали циклофосфан внутрибрюшинно по 4 мг на мышь или 200 мг/кг. Мышам экспериментальной группы в корм добавляли препарат "Альгасол". Суточная доза препарата составляла 0,02 мл на мышь или 1 мл/кг. Животные получали препарат ежедневно в течение 6 суток. На 7 сутки их убивали, селезенку отпрепаровывали и фиксировали в жидкости Боуэна (Э. Пирс, 1962). Метод подсчета проводили визуально на продольном разрезе всей селезенки.

С целью выяснения влияния препарата "Альгасол" на организм телят была проведена серия экспериментов. Для этого были сформированы 4 группы животных (по 5 голов в каждой) в возрасте 10 дней. Первая группа служила контролем (животные данной группы препарат не получали), животным опытных групп препарат выпаивали в смеси с молоком в дозах 0,5; 1,0 и 2,0 мл/кг массы тела соответственно в течение 10 дней.

Клиническому обследованию было подвергнуто 332 теленка черно-пестрой породы возрастом от 1-го до 15-и дней и от 2 до 3 месяцев, клинически здоровых и больных различными формами бронхопневмонии и диспепсии.

Диагностику болезней осуществляли с учетом эпизоотической ситуации в хозяйствах, характерных признаков, выявленных при клиническом обследовании поголовья. При диагностике бронхопневмонии у телят дополнительно использовали цинк-сульфатный бронхолегочной тест по И.П. Кондрахину (1997).

Инфекционные болезни исключали по результатам бактериологических исследований, проведенных в Кировской областной ветеринарной бактериологической лаборатории. Здесь же выявляли чувствительность микрофлоры к антибиотикам.

Для изучения микробиоценоза желудочно-кишечного тракта и дыхательных путей у телят были сформированы две группы в возрасте от 1-го до 15-и дней и от 2 до 3 месяцев, включающие клинически здоровых и больных диспепсией и бронхопневмонией. Материалом для бактериологических исследований служили пробы фекалий и носовой слизи, а также пробы патологического материала от павших телят. В исследованиях руководствовались Методическими указаниями по бактериологической диагностике смешанной кишечной инфекции молодняка животных, вызываемой патогенными энтеробактериями (1999). Идентификацию микроорганизмов проводили в соответствии с критериями, изложенными в определителе бактерий Берджи (Дж. Хулт с соавт., 2001).

С целью определения состояния нитроксидергических процессов и иммуно-биохимического статуса у подопытных телят брали кровь из яремной вены в утренние часы до кормления в динамике: исходный фон и на 5, 10 и 15 и 20 сутки после применения средств корригирующей терапии у телят, больных бронхопневмонией и на 3, 5, 7 и 10 сутки – у телят, больных диспепсией. Одновременно вели сбор утренней мочи.

Уровень концентрации эндогенного оксида азота в организме оценивали по количеству конечных стабильных метаболитов указанной нитроксидмолекулы, каковыми являются нитриты и нитраты (Н.Л. Емченко с соавт., 1994). Суммарную концентрацию стабильных метаболитов рассчитывали сложением концентрации содержания нитратов и нитритов (H. Grasemann et al., 1997).

Определение осмотической резистентности эритроцитов проводили в соответствии с методикой В.В. Меньшикова (1987). Устойчивость эритроцитов к кислотному гемолизу оценивали по методике В.Д. Прокопьева с соавт. (1998). Определение сорбционной способности эритроцитов осуществляли по методике А.А. Тогайбаева с соавт., (1988) в модификации В.М. Аксеновой с соавт., (1994).

О состоянии ПОЛ в плазме и эритроцитах судили по содержанию вторичных продуктов (МДА), реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (Н.Д. Стальная, Т.Г. Гаришвили, 1977). Для оценки общей антиоксидантной активности (АОА) плазмы и эритроцитов использовали эффект торможения или скорость ПОЛ модельной системы, которая инициировалась ионами двухвалентного железа (Г.И. Клебанов с соавт., 1988). Исследование активности каталазы проводили по методике, описанной М.А. Королюк с соавт. (1988). Содержание среднемолекулярных пептидов (СМП) в плазме (сыворотке) крови определяли по методу Н.И. Габриэлян с соавт. (1985).

В качестве тестов оценки морфо-биохимического статуса у животных использовали: определение содержания в крови гемоглобина – гемоглобинцианидным методом, подсчет количества эритроцитов и лейкоцитов в камере Горяева, выведение лейкограммы по Филипченко в окрашенных по Романовскому-Гимза мазках крови.

Изучение способности нейтрофилов крови к захвату частиц проводили на модели поглощения частиц полистерольного латекса диаметром 1,7 мкм по методу И.С. Фрейдлин с соавт. (1976) в модификации Л.Я. Эберта с соавт. (1983).

Лизосомальную активность нейтрофилов определяли по суммарному свечению числа лизосом в цитоплазме клеток, окрашенных акридиновым оранжевым, при люминесцентной микроскопии. Подсчет лизосом вели полуколичественно в "крестах" (И.С. Фрейдлин, 1984).

Исследование внутриклеточного кислородозависимого метаболизма фагоцитов проводили, используя НСТ-тест. Метод основан на учете интенсивности восстановления клетками нитросинего тетразолия (НСТ) в его нерастворимую форму – диформазан (А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский, 1989). Параллельно с помощью НСТ-теста определяли способность нейтрофилов крови отвечать повышением метаболической активности на стимуляцию частицами латекса – индуцированный НСТ-тест (А.Н. Маянский, О.И. Пикуза, 1993).

Определение Т- и В-лимфоцитов в крови осуществляли в реакции спонтанного розеткообразования по методу M. Jondal et al. (1972) в модификации Р.В. Петрова с соавт. (1984) и А.В. Зурочка (1984). Учет реакции осуществляли с помощью иммерсионной микроскопии и определяли количество образуемых розеток из 100 сосчитанных лимфоцитов в каждом мазке.

Концентрацию иммуноглобулинов класса М и G в сыворотке крови определяли по общепринятой методике (Mancini et al., 1965) в модификации А.А. Тихомирова (1992). Эти исследования проведены в медицинском центре "Familia" г. Челябинска при консультативной помощи доктора медицинских наук, профессора Зурочка А.В. Определение циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) в сыворотке крови проводили по методике, предложенной В. Гашковой с соавт. (1978).

Об изменениях в белковом обмене судили по содержанию в сыворотке крови общего белка, определяемого рефрактометрически, белковых фракций – нефелометрическим экспресс-методом (Б.И. Антонов с соавт., 1991), тиоловых (SH) групп белков – по Фаломееву (1981), активности ферментов переаминирования: аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы по методу Райтмана и Френкеля с использованием набора "Био-ла-тест", ЛДГ (В.С. Камышников, 2001; И.П. Кондрахин с соавт., 2004), мочевины по цветной реакции с диацетилмонооксимом, креатинина – по цветной реакции Яффе, цинк-сульфатный бронхолегочной тест по И.П. Кондрахину (2004).

О состоянии углеводного обмена судили по количеству глюкозы, определяемой глюкозооксидантным методом с набором "Глюкоза-ФДК" (В.В. Меньшиков с соавт., 1994); липидного – по содержанию общего холестерина по реакции Любермана-Бурхарда в модификации Илька, β-липопротеидов – по Бурштейну в модификации Виноградовой.

Изучение различных схем терапии больных телят бронхопневмонией и диспепсией проводили в четырех сериях опытов в условиях учхоза ВГСХА, ЗАО племзавод "Красногорский" и колхоза "Карсы" Челябинской области. В каждом хозяйстве были подобраны телята с признаками острой и хронической бронхопневмонии и простой и токсической диспепсией. Контрольные группы включали клинически здоровых животных. С целью оценки различных схем лечения нами были сформированы десять групп опытных телят (по 6 животных): первая – контрольная (здоровые телята в возрасте 1-3 месяца); вторая – базисная схема лечения при острой форме бронхопневмонии; третья – базисная схема лечения при хронической форме бронхопневмонии; четвертая и пятая – рекомендуемые схемы лечения при острой и хронической формах бронхопневмонии соответственно; шестая – контрольная (здоровые телята в возрасте 3-7 дней); седьмая и восьмая – базисная схема лечения при простой и токсической формах диспепсии; девятая и десятая – рекомендуемая схема лечения при простой и токсической формах диспепсии соответственно.

Базисная терапия телят, больных бронхопневмонией в учхозе ВГСХА включала следующие препараты: внутримышечное введение 4% раствора гентамицина (согласно наставлению по его применению), внутривенное введение 10% раствора кальция хлорида и 10% раствора глюкозы, а при диспепсии внутрь таблетки тримеразина, внутримышечное введение 4% раствора гентамицина (согласно наставлению по их применению), внутрибрюшинное введение раствора Рингера-Локка, выпойка внутрь отвара коры дуба. Базисная терапия бронхопневмонии телят в ЗАО Племзавод "Красногорский" включала: раствор энромага 5% внутримышечно – 3 мл 1 раз в день, раствор кальция хлорида 10% – 20 мл и раствор глюкозы 40% – 20 мл внутривенно через день, раствор кофеина бензоата натрия 10% подкожно 2 мл через день. В колхозе "Карсы" Челябинской области при простой диспепсии – травяной чай, таблетки тримеразина, а токсической – внутрибрюшинно жидкость Рингер-Локка.

Комплексная терапия, разработанная нами дополнительно к базовому лечению включала препарат "Альгасол", созданный на основе экстрактов из морских бурых водорослей и корня солодки. Его назначали внутрь из расчета 1 мл/кг массы два раза в день (утром и вечером). Дополнительно животным при обоих заболеваниях вводили нитамин; при бронхопневмонии – норсульфазол растворимый, согласно наставления по их применению. Курс лечения при острой форме бронхопневмонии длился от 5 до 7, при хронической – от 10 до 14 дней; при простой форме диспепсии – 3-5 дней, при токсической – 5-7 дней.

На заключительном этапе была проведена клиническая оценка предлагаемых схем терапии на больных телятах в ряде хозяйств Кировской и Челябинской областей, а также испытаны профилактические свойства препарата "Альгасол" в комплексе мероприятий при этих заболеваниях.

Обработку полученных данных проводили в рамках программы Statistica for Windows Ver. 6.0. Результаты исследования анализировали путем вычисления средней арифметической (М), ошибки средней арифметической (м), достоверности различий (Р) (В. Боровиков, 2001, В.И. Сергиенко, И.Б. Бондарева, 2000).

^ 2.2 Результаты собственных исследований




оставить комментарий
страница1/4
Дата25.08.2011
Размер447 Kb.
ТипАвтореферат, Образовательные материалы
Добавить документ в свой блог или на сайт

страницы:   1   2   3   4
Ваша оценка этого документа будет первой.
Ваша оценка:
Разместите кнопку на своём сайте или блоге:
rudocs.exdat.com

База данных защищена авторским правом ©exdat 2000-2017
При копировании материала укажите ссылку
обратиться к администрации
Анализ
Справочники
Сценарии
Рефераты
Курсовые работы
Авторефераты
Программы
Методички
Документы
Понятия

опубликовать
Документы

Рейтинг@Mail.ru
наверх