Методические указания к лабораторным работам по дисциплине «Микробиология молока и молочных продуктов» для специальности 2710«Технология молока и молочных продуктов icon

Методические указания к лабораторным работам по дисциплине «Микробиология молока и молочных продуктов» для специальности 2710«Технология молока и молочных продуктов


5 чел. помогло.
Смотрите также:
Рабочая программа курса по выбору “Теоретические основы разработки новых видов молочных...
Рабочаяпрограмма по дисциплине сд. 07 Микробиология молока и молочных продуктов...
Рабочая программа курса по выбору «Тара и упаковка» для специальности 271100 «Технология молока...
Рабочая программа дисциплины “Технология молока и молочных продуктов” для специальности 271100...
Рабочая программа дисциплины «Биология и микробиология» для специальностей: 260301 «технология...
Методические рекомендации и контрольные задания по дисциплине сд 03...
Рабочая программа по дисциплине «Технология отрасли» раздел «Технология молока и молочных...
Рабочая программа дисциплины специализации «Технология молочных консервов и заменителей цельного...
Рабочая программа дисциплины Пищевые добавки и наполнители в производстве молочных продуктов...
Отчет о самообследовании основной образовательной программы по специальности 260303 Технология...
Рабочая программа дисциплины «Новые физико-химические методы обработки при производстве молочных...
Рабочая программа дисциплины «Методы исследования свойств сырья и молочных продуктов» для...



Загрузка...
страницы:   1   2   3   4
скачать

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ


Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования

Кемеровский технологический институт пищевой промышленности

Среднетехнический факультет


Филиал кафедры «Технология хлеба, макаронных и кондитерских изделий»


МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

к лабораторным работам по дисциплине

«Микробиология молока и молочных продуктов»

для специальности 2710«Технология молока и молочных продуктов

Кемерово 2007


Составил:


Л.И. Плосконосова, преподаватель филиала кафедры ТХКМИ


^ Методическое указание рассмотрено и утверждено на заседании филиала кафедры «Технология хлеба, кондитерских и макаронных изделий»

Протокол № 46 «21» мая 2007 г


Методическое указание рассмотрено и утверждено на заседании кафедры «Технология хлеба, кондитерских и макаронных изделий»

Протокол № 1 «30» августа 2007 г


Методическое указание рассмотрено и утверждено метод

комиссией СТФ

Протокол № 1 «17» сентября 2007 г


Представлены методические указания к лабораторным работам по дисциплине «Микробиология молока и молочных продуктов» для специальности 260303 «Технология молока и молочных продуктов»


СОДЕРЖАНИЕ

Введение…………………………………………………………………………..…3
  1. ^

    Лабораторная работа № 1Знакомство с оборудованием

микробиологической лаборатории. Микроскоп, его устройство, правила


работы с ним………………………………………………………………………. 4

2 Лабораторная работа № 2 Приготовление и микроскопирование фиксированных окрашенных препаратов бактерий. Техника проведения

посевов и пересевов……………………………………………………………….12

3 Лабораторная работа №3 Изучение морфологических признаков дрожжей (препарат «раздавленная капля»)…………………………………….14

4 Лабораторная работа №4 Изучение морфологических признаков

мицелиальных грибов……………………………………………………………16

5 Лабораторная работа №5 Определение общего количества микроорганизмов в молоке..……………………………………………………..18

6 Лабораторная работа №6 Микробиологический контроль

качества заквасок………………………………..………………………………..22

7 Лабораторная работа №7 Микробиологический контроль

качества кисломолочных продуктов……………….……………………….…..24

8 Лабораторная работа № 8 Исследования молока на

присутствие стафилококков и маститных стрептококков…………..………...28

9 Лабораторная работа № 9 Определение антибиотиков в молоке……….30

10 Лабораторная работа №10 Микробиологический контроль

сыра и молока, используемого в сыроделии……………………………………..31

11 Лабораторная работа №11 Микробиологические

исследования сливочного масла…………………..…………………………….34

12 Лабораторная работа №12 Микробиологический

контроль сгущенного, сухого молока и мороженого…………………………..37

13 Лабораторная работа №13 Санитарно-гигиенический

контроль воды, воздуха, смывов с рук и оборудования………………………..40

Приложение 1………………………………………………………………….....44

Список литературы……………………….……………………………………….47



ВВЕДЕНИЕ


Данные методические указания предназначены для выполнения лабора­торной работы по дисциплине «Микробиология молока и молочных продуктов» студентами всех форм обучения.

Лабораторные занятия дополняют теоретический курс, позволяют лучше усвоить его, знакомят с фактическим материалом на практике. Целью лабораторных занятий по микробиологии является ознакомление учащихся с наиболее часто применяемыми методами микробиологических исследований, приобретение навыков работы с микроскопом.

В методических указаниях даны пояснения к выполнению лабораторных работ. После каждой работы приведены вопросы для проверки.

Каждый учащийся должен вести рабочую тетрадь, в которую заносятся:

1) наименование работы; 2) условия ее выполнения; 3) зарисовка препарата; 4) заключение по работе.

Все лабораторные работы выполняются в учебной лаборатории техникума. После выполнения всех лабораторных работ рабочая тетрадь подписывается преподавателем-руководителем лабораторных работ и предъявляется при сдаче

экзамена или получения зачета по дисциплине «Микробиология молока и молочных продуктов».

В данных методических указаниях изложены методы микробиологиче­ского контроля молока и молочных продуктов.

Материал по каждому занятию излагается в следующей последовательно­сти: вначале кратко формулируется цель занятия, затем определяется конкрет­ное задание и порядок выполнения, приводится перечень необходимого обору­дования и материалов, а также методические указания по проведению лабора­торной работы и контрольные вопросы.

Преподаватель принимает выполненную студентом лабораторную работу в индивидуальном порядке. Хорошо выполненные препараты и рисунки следу­ет рекомендовать дня ознакомления всем студентам. Для зачета, по окончанию лабораторно-практических занятий, студент представляет надлежащим образом оформленную тетрадь.

Целесообразно в конце занятия сообщать тему следующего практическо­го занятия и указывать литературные источники. Студенты в таких случаях приходят с готовыми конспектами, и преподавателю остается дать лишь целе­вую установку занятия, распределить задания, показать технику выполнения. После этого студенты приступают к самостоятельной работе.


^ Правила работы в микробиологической лаборатории

1 В помещении микробиологической лаборатории должны строго соблюдаться порядок и чистота, работать нужно обязательно в белом халате.

2 Рабочее место на учебном столе закрепляется за учащимися на все время занятий.

3 Учащийся работает всегда с одним и тем же микроскопом и несет, за него ответственность.

4 На учебном столе не должно быть никаких лишних предметов, мешающих работе,

5 Перед началом работы следует ознакомиться с содержанием лабораторной работы.

6 По ходу работы необходимо вносить в рабочую тетрадь записи и зарисовки наблюдений.

7 Все использованные инструменты (иглы, петли, пинцеты, пипетки и т.д.), а также предметные и покровные стекла должны стерилизоваться в пламени горелки или опускаться в сосуд с дезинфицирующей жидкостью. 8. В конце занятия необходимо сдать преподавателю все культуры микроорганизмов и другие материалы, а затем привести в порядок рабочее место.


^ Лабораторная работа №1


Знакомство с оборудованием микробиологической лаборатории.

Микроскоп, его устройство, правила работы с ним


Оборудование и материалы. Пробирки, колбы, бродильные трубки, чашки Петли, микробиологические петли, иглы, шпателя, пипетки Пастер, термостат, сушильный шкаф, аппарат Коха, автоклав, микроскоп,

Задание I. Знакомство с оборудованием микробиологической лаборатории

Пробирки и колбы при микробиологических работах используют для хранения жидких и плотных питательных сред е для выращивания культур микроорганизмов. Для предохранения питательных сред от попадания посторонних микроорганизмов из воздуха пробирки и колбы закрывают ватными пробками (рис.1). Приготовлений ватных пробок показано на рис.1.



Рис.1. Приготовление ватных пробок


Бродильные трубки (рис.2) используют для определения активности микроорганизмов по их газообразованию. Трубку заполняют жидкой культурой так, чтобы в запаянном конце не оставалось пузырьков воздуха. При брожении выделяющийся газ вытесняет жидкость из запаянного конца. Объем выделившегося газа определяют по имеющейся на запаянном конце шкале.




Рис.2. Бродильные трубки

Чашки Петри (рис. 3) применяют для выращивания культуры на плотных питательных средах.




Рис.3. Чашки Петри

Для пересева микроорганизмов из одной среды в другую пользуются микробиологической петлей (рис.4а), сделанной из вольфрамовой проволоки и укрепленной в стеклянном или металлическом держателе; иглой (рис, 46) и штапелем (рис.4в), используемым для размазывания жидкой культуры на поверхности плотной питательной среды. Пипетки Пастера (рис.4г) используются для пересева жидких культур микроорганизмов.




Рис.4. Микробиологический инструмент


Обязательным условием при всех микробиологических работах является стерильность питательных сред, посуды, инвентаря, т.е. отсутствие в них каких-либо микроорганизмов. Иглы и петли стерилизуют прокаливанием на пламени, а их ручки обжигают.

Пустые пробирки, колбы и бродильные трубки, закрытые ватными пробками; чашки Петри, шпатели и пипетки, завернутый в индивидуальный бумажные пакетика, стерилизуют сухим жаром (горячим воздухом) в сушильном шкафу или в печи Пастера. Представляющей собой металлический шкаф с теплоизоляцией и электронагревом. Стерилизация продолжается один час при температуре 170°С или два часа при температуре 150°С.

Стерилизация паром под давлением является очень эффективной и при однократной обработке приводит к уничтожению вегетативных и споровых форм. Этот способ осуществляется при помощи автоклава (рис.5).




Рис.5. Автоклав

1 - стерилизационная камера;

2 - кран для выхода воздуха;

3 - манометр;

4 - предохранительный клапан

5 - водопаровая камера;

6 - воронка для заполнения автоклава водой;

7 - крышка автоклава;

8 - подставка для размещения стерилизуемых материалов;

9 - электрообогреватель

Стерилизаций текучим паром применяют в том случае, если стерилизуемый объект (молоко, содержащие сахар и др.) при температуре свыше 100°С может уменьшиться. В аппарате Коха стерилизацию проводят текучим паром.



Рис.6. Кипятильник Коха

1-Стерилизационная камера;

2-Сеточная подставка для размещения стерилизуемых материалов;

3-Водомерное стекло;

4-Электрообогреватель;

5-Крышка с отверстием для выхода пара.


Стерилизация текучим паром проводится в течении 30-60 минут. Обычно стерилизуют три раза по 30 минут о перерывами в одни сутки между стерилизациями.

Пастеризацией называется уничтожение бесспоровых форм при нагревании объекта в течение 15 минут при 60-70°С. Эту обработку проводят для увеличения стойкости отдельных продуктов: вина, пива, молока и др. При пастеризации погибают многие патогенные микроорганизмы.

Для выращивания культур микроорганизмов применяют термостат, который представляет собой шкаф, снабженный электрообогревателям и терморегулирующим устройством. Терморегулирующее устройство позволяет поддерживать температуру внутри термостата на нужном уровне в течение длительного срока.

Задание 2. Изучите устройство микроскопа и правила работы с ним.

Устройство микроскопа

Микроорганизмы, за исключением плесневых грибов, нельзя рассматривать невооруженным глазом, поэтому для установления их форм, размеров, строения используют микроскоп.



Рис.7. Микроскоп

Микроскоп (от греческого слова микрос - малый, скопио - смотрю) - это оптический прибор, состоящий из трех основных частей: механической, осветительной и оптической. Механическая часть, или штатив, состоит из следующих деталей:

ножки (I) - металлической плиты, служащей опорой микроскопа, тубусодержателя (2) в форме ручки, за которую держат микроскоп при переносе, тубуса (3) - зрительной трубки микроскопа. В верхнее отверстие тубуса свободно вставим окуляр (4), на нижнем конце тубуса находится вращающийся вокруг своей оси револьвер (5), в который ввинчены объективы (6). Вращая «револьвер», можно сменить объективы во время работы с микроскопом, подводя любой объектив под тубус: маленькая пружинка, защелкиваясь в свой паз, удерживает объектив в этом положении. При установлении объектива ощущается щелчок.

Тубус перемещается вдоль оптической оси микроскопа с помощью двух винтов - макрометрического (7) и микрометрического (8). Макромтрический винт служит для грубой установки фокуса, т.е. на то расстояние препарата, при котором он делается видимым. Для точной установки объектива служит микрометрический винт. Полный оборот его перемещает тубус на 0,1 мм, поворот на одно деление перемещает тубус на 0,002 мм дай 2 мкм Микрометрический винт является одной из наиболее чувствительных частей микроскопа и обращаться с ним следует особо осторожно.

Изучаемый препарат помещают на предметный столик (9) и закрепляют имеющимися на нем зажимами (клеммами) (10). В центре столика имеется отверстие для прохождения света, освещающего препарат.

Рядом с микрометрическим винтом находится винт для регулировки конденсора (II).

Осветительная часть микроскопа находится под предметным столиком и состоит из зеркала (12) и конденсора с диафрагмой. (13) и светофильтром (14),

Конденсор представляет собой двояковыпуклую линзу, которая собирает отраженные от зеркала лучи света в пучок и направляет его в плоскость препарата, что обеспечивает наилучшее освещение объекта. Поднимая и опуская конденсор, можно регулировать степень освещенности препарата, в нижней части конденсора расположена ирисдиафрагма, с помощью которой также можно менять яркость освещения, суживая или полностью раскрывая ее. Зеркало обычно подвижное и двустороннее: с одной стороны плоское, а с другой - вогнутое. Вогнутым зеркалом пользуются при искусственном освещении.

Оптическая часть микроскопа состоит из объективов (6) и окуляра (4).

Объектив состоит из системы линз, заключенных в металлическую оправу. Он обладает увеличительной способностью и определенной глубиной фокуса. Чем больше кривизна линз, тем короче фокусное расстояние и больше увеличение объектива.

Объектив дает действительное увеличенное обратное изображение предмета. Объективы подразделяются на сухие и иммерсионные (погружные). При рассматривании препарата сухим объективом между его фронтальной (обращенной к предмету) линзой и препаратом находится воздух. Лучи света проходят через покровное стекло, воздух, стекло объектива. Все эти среды имеют различный показатель преломления, поэтому часть лучей света отклоняется и не попадает в объектив.

При работе с иммерсионным объективом для устранения светорассеивания расстояние между фронтальной линзой и препаратом заполняют иммерсионным (кедровым) маслом. Кедровое масло имеет такой же показатель преломления, как и стекло.

Окуляр состоит из двух линз, заключенных в общую металлическую оправу. Окуляр увеличивает изображение, данное объективом. Увеличение, которое дает окуляр, указывается на самом окуляре (7х, 10х. 15х и др.).

Для определения общего увеличения предмета микроскопом необходимо увеличение объектива умножить на увеличение окуляра.

Для улучшения изображения и расширения границ видимости применяются и другие методы микроскопирования.

Широкое применение получила электронная микроскопия, при которой используется поле электронов - электронные лучи. Электронный микроскоп позволяет увеличить предмет в тысячи, десятки и сотни тысяч раз.

В рабочей тетради начертите микроскоп в обозначьте его основные части.

Вычислить, чему равно увеличение микроскопа, если при работе применяют:

1) окуляр 1, объектив 40;

2) окуляр 7х, объектив 20.

Правила работы с биологическим микроскопом

Микроскоп вынимают из футляра и переносят к рабочему месту, держа его одной рукой за тубусодержатель, а другой рукой поддерживая за основание штатива. Наклонять микроскоп в сторону нельзя, так как при этом окуляр может выпасть из тубуса.

Микроскоп помещают на рабочем столе тубусодержателем к себе на расстоянии 3-5 см от края стола. Устанавливают правильное освещение поля зрения микроскопа. Для этой цели, смотря в окуляр микроскопа, зеркалом направляют луч света от источника света в объектив. Настройка освещения производится с объективом 8х (10х). При правильной установке поле зрения микроскопа будет выглядеть в виде хорошо и равномерно освещенного круга.

На предметный столик помещают исследуемый препарат к закрепляют его клеммами.

Сначала препарат рассматривают с объективом 8х, в затем переходят к большим увеличениям.

Окончив просмотр препарата, сначала поднимают тубус, а затем препарат снимают со столика.

Для защиты объектива от пыли окуляр микроскопа следует оставлять в тубусе. При смене окуляров надо следить за тем, чтобы в тубус не попала пыль.

^ Электронная микроскопия

К электронной микроскопии прибегают в случаях, когда необходимо рассмотреть частицы, невидимые в самые сильные микроскопы. В электронном микроскопе используются не световые лучи, а поток движущихся электронов. Роль преломляющих линз выполняют мощные - электромагнитные поля, образуемые цилиндрическими электромагнитами. Электронный микроскоп состоит из нескольких сложных узлов:

- осветительной системы, включающей электронную пушку и конденсорную линзу;

- камеры образцов с предметным столиком;

- линз увеличения - объективной и проекционной;

- фотокамеры;

- пульта управления;

- вакуумной системы;

- установка для электропитания микроскопа.

Электронный микроскоп действует с помощью электроэнергии. Система электропитания всех узлов размещена в металлическом шкафу и находится за колонкой микроскопа. Для того, чтобы электроны, проходящие через линзу, не сталкивались с частицами воздуха, воздух из колонны удаляется о помощью двух вакуум-насосов, расположенных в стенде микроскопа.

Во время работы микроскопа при накаливании электрическим током вольфрамовой нити диаметром 0,1 мл в электронной пушке возникает пучок электронов.

Электроны, покинувшие нить под действием тока высокого напряжения (50000 В), приобретают колоссальную скорость и, пролетая внутрь колонны микроскопа, последовательно проходят через магнитные поля трех линз:

конденсорной, объективной и проекционной.

Конечное изображение наблюдаемого объекта проектируется на экране. Экран покрыт люминесцирующим составом, который под ударами падающихэлектронов дает светящееся изображение объекта. Под экраном вмонтирована фотокамера для фотографирования интересующих мест рассматриваемого объекта.

Для проведения электронной микроскопии необходимо правильно подготовить препарат. Бактерия, вирусы и другие биологические объекты должны быть освобождены от среды, солей, тканей. Для этого препарат промывается в дистиллированной воде. Отмытые объекты наносят на очень тонкую пленку (заменяющую предметное стекло), изготовленную из какого-либо пластического материала, например, коллодия. Для приготовления пленки каплю 1,5%-ного раствора коллодия в амилацетате наносят на поверхность воды. После испарения раствор, геля образуется тонкая пленка толщиной около 0,0000001 см. Эту пленку переносят на решетку с очень мелкими ячейками и готовят на ней препарат бактерий (препарат не окрашивается). Затем препарат отмывают дистиллированной водой, подсушивают и закрепляют в держателе приемной камеры микроскопа-

Через такую тонкую пленку лучи проходят не задерживаясь, падают на объективную линзу.

При помощи электронного микроскопа можно получить изображение объекта, увеличенное в 40000-50000 раз. Последующее оптическое увеличение в 5-6 раз позволяет получить полезное увеличение до 200000-300000 раз. Разрешающая способность современных электронных микроскопов от 1,5 до 0,8 и даже 0,5 км;

Одним из недостатков электронной микроскопии является исследование микроорганизмов только в фиксированном состоянии, так как электроны, проходя через препарат, убивают живую клетку.

^ Подготовка предметных и покровных стекол

Препараты готовят на предметных стеклах и покрывают сверху покровным стеклом.

Предметные и покровные стекла должны быть чистыми и тщательно обезжиренными. Для проверки чистоты стекла на его поверхность наносят каплю воды. При достаточном обезжиривании капля растекается равномерно и не собирается в выпуклые пузырьки. Стекла, бывшие в употреблении выдерживают 1-2 ч в хромовой смеси (1л воды, 50 г дихромата калия, 100 г технической серной кислоты),. После чего ополаскивают, теплой водой и спиртом, В повседневной работе для удаления жира предметные стекла натирают куском мыла, после чего вытирают чистой хлопчатобумажной салфеткой. Хранят чистые предметные стекла в сухом состоянии или в банках с притертыми пробками, заполненными 96%-ным спиртом. Вынимать стекла следует пинцетом. Перед употреблением стекла просушивают на воздухе и протирают чистой тканью. Покровные стекла также должны быть хорошо вымыты, высушены и храниться в специальных коробках или чашках Петри.


Вопросы для самопроверки


  1. 1 Чем производится пересев микроорганизмов из одной среды в другую?

  2. Укажите методы и режим стерилизации стеклянной посуды.

  3. Как производится стерилизация питательных сред в кипятильнике Коха?

  4. Перечислите и укажите значение каждой части оптической системы микроскопа.

  5. Как определить увеличение оптического микроскопа?

  6. Какие части микроскопа входят в его механическую часть?

  7. Как производится подготовка предметных и покровных стекол к работе?

^ Лабораторная работа № 2

Техника микроскопирования. Приготовление и

микроскопирование фиксированных окрашенных препаратов.

Изучение морфологических признаков бактерий

^ Оборудование и материалы. Бактерии-кокки, свежая культура сенной палочки, водный раствор метиленовой сини, предметные и покровные стекла, бактериологическая петля, горелка, промывалка, микроскоп, ванночка с мостиком (две параллельные стеклянные палочки, с единенные кусочком резинового шланга).

Порядок приготовления рабочего раствора. Прежде чем приготовить рабочие растворы красок, нужно заблаговременно из сухих красок приготовить насыщенный спиртовой раствор. Для этого краску заливают 96%-ным спиртом в соотношении 1:10. Рекомендуется брать на 100 мл спирта 7,0 г метиленовой сини, 4,8 г генцианвиолета, 8,1 г основного фуксина. Из насыщенных спиртовых растворов готовят водные рабочие растворы: к 30 мл насыщенного спиртового раствора метиленовой сини добавляют 100 мл дистиллированной воды и 10 мл 1%-ного раствора едкого кали (или едкого натра). Раствор краски может долго сохраняться и по истечении некоторого времени красит лучше, чем свежеприготовленный.

^ Задание I. Изучите технику микроскопирования

Согласно правилам работы с биологическим микроскопом, приведенным выше, установите микроскоп перед источником света. С помощью "револьвера" закрепите объектив с увеличением 8х. Легкий упор и звук щелчка пружины "револьвера" свидетельствует о том, что объектив установлен по оптической оси макрометрическим винтом опустите объектив на расстояние 0,5-1 см от предметного столика. Полностью откройте ирисовую диафрагму и поднимите конденсор до упора. Смотря в окуляр и, поворачивая зеркало, направив лучи от источника света через отверстие ирисовой диафрагмы на объектив. Приготовленный заранее окрашенный препарат поместите на предметный столик и закрепите клеммами. С помощью сухого объектива 8х рассмотрите несколько полей зрения. Нужный для исследования участок установите в центре поля зрения. Поднимите тубус, вращением револьвера переведите объектив с увеличением 40х. Наблюдая сбоку, макроцентрическим винтом опустите тубус с объективом почти до соприкосновения с препаратом. Смотря в окуляр, очень медленно поднимайте тубус до появления контуров изображения. Точную фокусировку следует производить с помощью микрометрического винта, вращая его в ту или другую сторону, по не более, чем на один полный оборот. Рассмотрев препарат, поверните макрометрический винт, поднимите тубус, снимите со столика препарат. Рассмотрите 2-3 фиксированных препарата.

^ Задание 2. Приготовьте фиксированный окрашенный препарат бактерий

Преимущества препаратов фиксированных клеток. Фиксированными считаются клетки микроорганизмов, в которых прервали жизненные процессы, но полностью сохранена тонкая структура. Окрашенные фиксированные клетки и части их строения резче выделяются на фоне препарата. Это облегчает изучение формы, размеров, внутреннего строения клетки. Фиксированные препараты обычно рассматривают с иммерсией. Приготовление препарата состоит из следующих операций:

Приготовление мазка, высушивание, фиксация и окраска мазка.

^ Порядок проведения работы. Готовить препарат нужно на совершенно чистых обезжиренных предметных стеклах. Предметные стекла берут пинцетом или пальцами за ребра и проносят через пламя горелки, слегка обжигая, после чего кладут обожженной поверхностью кверху на мостик. Бактериологической петлей, простерилизованной в пламени горелки и охлажденной, нанести каплю исследуемой взвеси микроорганизмов на предметное стекло и краем покровного (предметного) стекла прикоснуться под углом 30° к капле исследуемого материала (рис.8).




Рис.8.

1. Приготовление мазка.

1. Быстрым движением от себя равномерно тонким слоем распределить исследуемую пробу по всей поверхности стекла.

2. Высушивание.

2. Приготовленный мазок высушить при комнатной температуре.

3. Фиксация мазка.

Затем высушенный мазок фиксируется для того, чтобы: умертвить клетки микроорганизмов, плотно прикрепить их к стеклу, в результате чего они не смываются при последующих операциях; улучшить окрашивание, т.к. мертвые клетки становятся более проницаемыми для красителей. Препарат мазком вверх 3-5 раз пронести через наиболее горячую часть пламени горелки. Предметное стекло с мазком нагревают не более 2-3 секунд, пока не возникнет ощущение легкого жжения, если приложить его к кисти руки. Более длительная термиче­ская фиксация может изменить структуру микробных клеток и их форму.

4. Окрашивание мазка.

На фиксированный препарат, помещенный на мостик, установленный над ванночкой, нанести 3-5 капель (в зависимости от величины мазка) раствора красителя. Через 3-5 минут препарат промывается водой из промывалки до тех пор, пока стекающая вода станет почти неокрашенной. При этом стекло следует держать наклонно. Затем окрашенный препарат высушивают на воздухе.

5. Микроскопировать окрашенный мазок следует с иммерсионным объективом 90х. Для этого на препарат наносят каплю иммерсионного масла, помещают на предметный столик микроскопа и зажимают клеммами. Поворачивая -револьвер, иммерсионный объектив устанавливают по центральной оптической оси. Конденсор, следует поднять вверх до упора, ирисовую диафрагму конденсора открыть полностью. Глядя сбоку, макрометрическим винтом опустить тубус до погружения объектива в масло, почти до соприкосновения линзы с предметным стеклом препарата. Смотря в окуляр и медленно вращая макрометрический винт на себя, не отрывая объектив от масла, приподнимите тубус до появления контуров объекта. Помните, что свободное рабочее расстояние в иммерсионном объективе равно 0,1-0,15 мм. Затем микрометрическим винтом произведите точную фокусировку. Рассмотрите препарат в нескольких полях зрения.

Рассмотренные препараты надо зарисовать. По окончании работы поднять тубус, снять препарат в осторожно протереть фронтальную линзу объектива сначала сухой мягкой хлопчатобумажной салфеткой, затем той же салфеткой, но слегка смоченной чистым бензином. Препарат освободить от масла сначала, кусочком фильтровальной бумаги, затем обработать стекло бензином.

^ Задание 3. Методы окраски бактерий по Граму.

1) На фиксированный мазок через полоску фильтрованной бумаги наносят краситель генциан-виалет на 2-3 минуты.

2) С мазка снимают фильтровальную бумагу и окрашиваю мазок раствором Люголя 1-2 минуты,

3) Сливают раствор Люголя с мазком и обрабатывают препорат 96% спиртом 30-60 секунд.

4) Промывают мазок водой и подсушивают фильтрованной бумагой. (ГР(+) Б в темно-фиолет; ГР(-) Б - бесцвет.)

5) Дополнительно окрашивают препарат фуксином 2-3 минуты, промывают подсушивают фильтровальной бумагой. (ГР. (+) Б окрашивают в темно-фиолет;

ГР(-) Б - розовый.)

^ Вопросы для самопроверки

1 Каков порядок просмотра препарата в биологическом микроскопе?

2 Как определить увеличение микроскопа?

3 Какое фокусное расстояние у линз при работе с объективом 8х и 40х?

4 Перечислите порядок приготовления фиксированного препарата.


^ Лабораторная работа №3

Изучение морфологических признаков дрожжей

(препарат "раздавленная капля")

Оборудование и материалы. Чистая культура дрожжей и прессованные хлебопекарные или пивные дрожжи, предметные и покровные стёкла, бактериальные петли и иглы, пипетка, фильтровальная бумага, ванночка с мостиком, промывалка, микроскоп.

^ Основные признаки дрожжей. Дрожжи представляют собой одноклеточные неподвижные микроорганизмы с наличием дифференцированного ядра, с размерами в поперечнике 3-5 мкм, по длине и 6-12 мкм. Форма клеток дрожжей чаще округлая, яйцевидная (Saccharomyces). цилиндрическая (Schisosaccharomyces), лимоновидная (Saccharomycodes).

В цитоплазме дрожжевой клетки можно увидеть различного рода включения - капель жира, гликоген, валютин. По мере старения клетки в ней появляются вакуоли-полости, наполненные клеточным соком. Размножаются дрожжи преимущественно путем почкования, многие способны еще и к спорообразованию.

^ Задание I. Приготовить препарат типа "раздавленная капля"

Техника приготовления препарата «раздавленная капля». На середину чистого предметного отекла наносят небольшую капли воды. бульона или физиологического раствора (0,5%-ный раствор NaCI). В нее петлей или иглой вносят небольшое количество исследуемого материала, после чего хорошо размазывают до получения слабомутной суспензии. При рассматривании микроорганизмов, выросших на жидких средах, капли воды на предметное стекло можно не наносить. Покровное стекло ставим на ребро у края капли с микроорганизмами и постепенно опускаем, стараясь, чтобы между стёклами не образовывались пузырьки воздуха, мешающие микроскопированию. Стеклянным концом петли прижимают покровное стекло к предметному. Излишек выступившей жидкости убирают полоской фильтровальной бумаги. Приготовленный препарат сразу же исследуют - сначала с небольшим увеличением (объектив 8х), отыскивая участок с наиболее четким расположением микроорганизмов, а затем рассматривают его с объективом 40х. Порядок выполнения работы. Для приготовления препарата «раздавленная капля» стерильной зубочисткой или спичкой без серы) снять налет со своих зубов, лучше между деснами и зубами, внести его в каплю воды и приготовить из этого материала препарат типа "раздавленная капля.". Препарат рассмотреть-с объективом 40х. Зарисовать все встречающиеся формы бактерий.

^ Задание 2. Приготовить в живом виде препарат дрожжей

Порядок проведения работы. Приготовить два-три препарата "раздавленная капля" различного вида чистых культур дрожжей, "зарисовать и описать эти препараты. Найти в них зарисовать почкующиеся метки.

^ Вопросы для самопроверки

1 Напишите порядок приготовления препарата "раздавленная капля".

2 Какую форму имеют дрожжевые клетки?

3 По каким признакам можно отличить бактериальную клетку от дрожжевой?

4 Каким вегетативным способом размножаются дрожжи, зарисуйте последовательность размножения.

^ Лабораторная работа №4

Изучение морфологических признаков мицелиальных грибов

Оборудование и материалы. Предметные и покровные стекла, препаровальные иглы, ванночка с мостиком, промывалка, микроскоп, чистые культуры мицелиальных грибов, смесь равных объемов этилового спирта и глицерина.

^ Основные признаки мицелиальных грибов, мицелиальные грибы -это обширная группа низших растительных организмов, лишенных хло­рофилла. Тело мицелиального гриба, грибница или мицелий, состоит из множества переплетающихся нитей - гифов, которые густой сетью сплетаются на поверхности питательного субстрата. От ветвистого -, мицелия отходят плодоносящие гифы - спорангии и конидиеносцы, на концах которых находятся плодовые тела.

^ Техника приготовления препаратов. При исследовании грибов из их культур берется небольшой кусочек мицелия с помощью двух препаровальных игл. Мицелий на предметном стекле осторожно расщепляют иглами, стремясь как можно лучше разъединить гифы. В качестве жидкости используют смесь спирта и глицерина.

Задание I. Изучите морфологические признаки гриба Mucor

^ Порядок проведения работа. Для приготовления препарата возьмите, двумя препаровальнымя иглами черновато-серый пушистый воздушный мицелий гриба Mucor и осторожно внесите его в каплю смеси спирта и глицерина на предметном стекле, наложите покровное стекло, не придавливая его, чтобы не раздавить спорангий. При микроскопировании выявите одноклеточное строение мицелия и органы размножения - спорангиеносцы. Рассмотрите их по всей длине, передвигая препарат. Спорангиеносцы мукора, как прайилб, простые, неветвящиеся, отрастают от грибницы одиночно. Спорангии, сидящие на ихверхушках (колумеллах), крупные шарообразные с массой спор, которые видны через тонкую прозрачную оболочку спорангия. Споры, называемые спораигиоспорами, одноклеточные, круглые, гладкие, бесцветные или сероватые.

В рабочей тетради зарисуйте гриб Mucor и дайте обозначение частей его мицелия.

^ Задание 2. Изучите морфологические признаки гриба Aspergillus

Порядок проведения работы. Для приготовления препарата гриба Aspergillus нужно взять воздушный окрашенный мицелий. Препарат готовится также, как и препарат гриба Mucor.

При микроскопировании найти многоклеточные гифы мицелия и органы размножения - конидиеносцы с конидиями. Конидиеносец по внешнему виду простой, одноклеточный, неветвящийся. На конце его имеется булавовидное вздутие, на котором расположены в один ярус вытянутые бутылочковидные клетки - стеригмы с отшнуровывающимися от них конидиями. Конидии располагаются по радиусам шара и напоминают струи воды, выливающейся из лейки, поэтому эти грибы иногда называют леечной плесенью. У разных видов плесени конидии окрашены различно.

Зарисуйте в тетради гриб Aspergillus и дайте обозначение частей его мицелия.

^ Задание 3. Изучите морфологические признаки гриба Endomyces lactis

Порядок проведения работы. Для приготовления препарата" Endomyces lactis снять препаровальной иглой, слегка соскабливая, его белый стелющийся бархатистый мицелий с субстрата (кисломолочных продуктов, квашеных овощей, прессованных дрожжей). При микроскопировании установите многоклеточность мицелия и отсутствие специальных органов размножения. Гриб размножается оидиями, которые образуются на концах гифа путем расчленения виде бесцветных клеток прямоугольной или округло прямоугольной формы. В препарате могут наблюдаться цепочка не распавшихся оидий. В рабочей тетради зарисуйте препарат и дайте обозначение каждой части мицелия.

^ Задание 4. Изучите морфологические признаки гриба Penicillium

Порядок проведения работы. Снять крышку с чашки Петри с колониями гриба Penicillium. Поставить чашку на предметный столик. Наблюдая сбоку, макрометрическим винтом опустите тубус с объективом 8х на расстояние 5-10 мм от чашки. Смотря в окуляр медленно опускайте тубус до появления контуров изобретения. Рассматривать следует окончания колоний. В рабочей тетради зарисуйте конидиеносец со стеригмами и конидиями.

^ Задание 5. Определите вид мииелиального гриба, выросшего на поверхности пищевого продукта

Порядок проведения работы. Для определения рода и вида мицелиальных грибов приготовьте препарат "раздавленная капля" из небольшого кусочка мицелия, взятого препаровальными иглами с поверхности пищевого продукта. Рассмотрите строение мицелия и найдите органы размножения. Для установления рода и вида исследуемого гриба следует использовать определитель (таблицы грибов), который имеется в лаборатории. Препарат зарисуйте и опишите.

^ Вопросы для самопроверки

1 Каковы особенности приготовления препарата мицелиальных грибов.

2 Морфологические особенности мицелиальных грибов: характеристика грибницы, особенности строения клетки мицелиальных грибов.

3 Способы размножения мицелиальных грибов.



Лабораторная работа №5

Определение общего количества микроорганизмов в молоке


Цель работы: Ознакомиться с методиками определения общего количества микроорганизмов в молоке свежем и пастеризованном. Определить антибиотики в молоке.

Задания

1.Ознакомиться с методами определения общего количества микроорганизмов в свежем пастеризованном молоке.

  1. Определить свежесть молока пробой на редуктазу с метиленовым голубым и с резазурином.

  2. Определить антибиотики в молоке.





Скачать 0.78 Mb.
оставить комментарий
страница1/4
Дата29.09.2011
Размер0.78 Mb.
ТипМетодические указания, Образовательные материалы
Добавить документ в свой блог или на сайт

страницы:   1   2   3   4
средне
  3
хорошо
  1
отлично
  4
Ваша оценка:
Разместите кнопку на своём сайте или блоге:
rudocs.exdat.com

Загрузка...
База данных защищена авторским правом ©exdat 2000-2017
При копировании материала укажите ссылку
обратиться к администрации
Анализ
Справочники
Сценарии
Рефераты
Курсовые работы
Авторефераты
Программы
Методички
Документы
Понятия

опубликовать
Загрузка...
Документы

Рейтинг@Mail.ru
наверх