Фармакогностическое изучение растений рода фиалка и спектр их фармакологической активности 14. 04. 02 фармацевтическая химия, фармакогнозия icon

Фармакогностическое изучение растений рода фиалка и спектр их фармакологической активности 14. 04. 02 фармацевтическая химия, фармакогнозия


1 чел. помогло.
Смотрите также:
Молекулярное конструирование и целенаправленный синтез n производных 1,3-диазинона-4 14. 04...
СтандартизациЯ конского каштана обыкновенного ( aesculus hippocastanum L...
Разработка методик анализа для выявления фальсифицированных лекарственных средств 14. 04. 02...
Примерная программа рекомендуется для направления подготовки (специальности) 111801...
Разработка методик определения дицикловерина гидрохлорида и тропикамида в моче для целей...
Разработка способа получения и стандартизация экстракта жидкого противодиабетического 14. 04...
Методическое пособие по самоподготовке и выполнению контрольных работ для студентов IV курса...
Фитохимическое и технологическое исследование листьев осины обыкновенной 14. 04...
Фармакогностическое изучение ribes rubrum L., Punica granatum L., Oenot h erae biennis L...
Пояснительная записка Фармацевтическая химия занимает ведущее место в системе высшего...
Исследования по стандартизации сырья и настоек гомеопатических матричных кактуса...
Аннотация к рабочей программе дисциплины «Органическая химия»...



Загрузка...
страницы:   1   2   3
скачать
На правах рукописи


БУБЕНЧИКОВ РОМАН АЛЕКСАНДРОВИЧ


ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ

ИЗУЧЕНИЕ РАСТЕНИЙ РОДА ФИАЛКА И СПЕКТР ИХ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ

14.04.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия




АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора фармацевтических наук



Пятигорск - 2011

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерство здравоохранения и социального развития Российской Федерации.




^ Научный консультант: доктор фармацевтических наук, профессор

Маркарян Артем Александрович


Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор

Ермакова Валентина Алексеевна


доктор фармацевтических наук, профессор

^ Куркин Владимир Александрович


доктор медицинских наук, профессор Тюренков Иван Николаевич


Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН.


Защита состоится «____» ______ 2011 г. в _____ часов на заседании диссертационного совета Д 208.069.01 при ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава» (357532, Ставропольский край, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11).


С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава» (357532, Ставропольский край, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11).


Автореферат разослан « ____»___________2011 г.


Ученый секретарь

диссертационного совета

Д 208.069.01 Е.В. Компанцева


^ ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Болезни органов дыхания широко распространены среди населения, они занимают одно из ведущих мест по заболеваемости, часто являясь причиной трудопотерь, инвалидизации и смертности населения. Рост заболеваемости дыхательных путей обусловлен ухудшением социально-экономических условий жизни, неблагоприятной экологической обстановкой, снижением иммунитета, ростом резистентности возбудителей патологии к применяемым антибиотикам, возрастающий этиологической ролью условно-патогенной микрофлоры (Чучалин А.Г., 2007; Стрельцова Е.Н., 2007).

В настоящее время для лечения заболеваний органов дыхания используется широкий арсенал синтетических препаратов. Однако, их применение в клинической практике часто сопровождается развитием побочных явлений и осложнений (Клиппел Д.Х., 2001).

Наряду с синтетическими препаратами в терапии этих заболеваний значительное место занимают лекарственные средства растительного происхождения, которые имеют широкий спектр фармакологического действия, обладают низкой токсичностью, мягкостью действия, способны быстро устранять симптомы обострения, не имеют отрицательных побочных эффектов при длительном применении. Наиболее часто в комплексной терапии заболеваний дыхательной системы фитопрепараты используют в качестве отхаркивающих, противовоспалительных, иммуностимулирующих, антимикробных средств.

Одним из путей увеличения фитопрепаратов является расширение спектра действия фармакопейных лекарственных растений и изучение возможности использования в научной медицине близкородственных видов. С этой точки зрения большой интерес представляют растения рода Фиалка.

В медицинской практике используются лишь два вида: фиалка трехцветная и фиалка полевая, которые применяются в виде настоев из травы в качестве отхаркивающего средства (Машковский М.Д., 2008). Растения рода Фиалка имеют достаточную сырьевую базу, широко применяются в народной медицине в качестве отхаркивающих и противовоспалительных средств. Из растений рода Фиалка наиболее изучен химический состав фиалки трехцветной, фиалки полевой и фиалки душистой (Растительные…, 2009, Бубенчиков Р.А., 2002). Химический состав других видов данного рода практически не изучен. Используемая лекарственная форма фармакопейных видов – настой имеет ряд недостатков, связанных с невозможностью точного дозирования и коротким сроком хранения. Все это делает актуальным вопрос разработки оптимальных лекарственных форм в виде сухих и густых экстрактов и представляет интерес в плане рационального использования лекарственного растительного сырья.

Существующая нормативная документация на траву фиалки трехцветной и фиалки полевой не позволяет объективно оценивать качество лекарственного сырья, т.к. не предусматривает стандартизацию сырья по содержанию действующих веществ и не учитывает пути его дальнейшего использования, в связи с чем возникает необходимость в разработке новых подходов к стандартизации сырья фиалки трехцветной и фиалки полевой и созданию для них современной нормативной документации.

Таким образом, исследования направленные на изучение растений рода Фиалка флоры Центрального Черноземья, их химического состава, фармакологического действия, стандартизации сырья, расширение сырьевой базы фармакопейных видов фиалок с целью создания на их основе фитопрепаратов для лечения заболеваний органов дыхания является актуальной проблемой.

^ Цель и задачи исследования. Целью работы является теоретическое и экспериментальное обоснование возможности расширения сырьевой базы фиалок на основе их фармакогностического и фармакологического исследования с целью создания фитопрепаратов для лечения заболеваний органов дыхания.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

        • на основе данных литературы по распространенности, сырьевым ресурсам, химическому составу, применению растений в народной медицине для лечения заболеваний органов дыхания выделить перспективные виды для дальнейшего изучения;

  • определить качественный состав биологически активных веществ растений рода фиалка и их количественное содержание;

  • выделить сумму фенольных соединений и разделить их на индивидуальные компоненты;

  • установить структуру индивидуальных соединений фенольной природы;

  • выделить и изучить полисахариды изучаемых видов;

  • разработать нормативную документацию на лекарственное растительное сырье;

  • провести фармакологические исследования настоев и комплексов биологически активных веществ, полученных из изучаемых видов;

  • предложить комплексную переработку сырья фиалок с последовательным получением густого экстракта, суммы водорастворимых полисахаридов и пектиновых веществ на примере сырья фиалки трехцветной;

  • разработать состав и технологию жидкой лекарственной формы-сиропа на основе сухого водорастворимого экстракта травы фиалки полевой;

  • выявить дополнительные источники сырья фармакопейных видов фиалок во флоре Центрального Черноземья за счет внедрения новых видов (фиалки душистой, фиалки сомнительной, фиалки удивительной, фиалки собачьей, фиалки скальной, фиалки опушенной, фиалки донской).

^ Научная новизна. Впервые на основании данных по систематическому положению, распространенности и сырьевым ресурсам флоры Центрального Черноземья установлено, что наиболее перспективными для фармакогностического изучения являются фиалка трехцветная, фиалка полевая, фиалка душистая, фиалка сомнительная, фиалка удивительная, фиалка собачья, фиалка скальная, фиалка опушенная, фиалка донская.

Исследования химического состава видов рода Фиалка позволили получить новые данные о содержание в них биологически активных веществ.

Различными методами хроматографии (бумажной, тонкослойной, ВЭЖХ) в исследуемых растениях идентифицировано 30 фенольных соединений, из них 21 впервые. Выделено 23 вещества фенольной природы и подтверждена их структура. Фенольные соединения фиалок представлены простыми фенологликозидами: арбутином; кумаринами: кумарином, умбеллифероном, скополетином, герниарином, дикумарином; оксикоричными и оксибензойными кислотами: феруловой, изоферуловой, неохлорогеновой, хлорогеновой, кофейной, салициловой, коричной, галловой, эллаговой; флавоноидными соединениями, в том числе: халконами – изосалипурпозидом; флаванонами - гесперидином; флавонами: апигенином, лютеолином и их гликозидами; флаванонолами: дигидрокверцетином; флавонолами: кверцетином, кемпферолом и их гликозидами.

Установлено, что общим и доминирующим флавоноидным соединением среди исследованных видов фиалок, имеющим значение для целей стандартизации является рутин.

Для растений рода фиалка характерно наличие гликофлавоноидов, среди которых идентифицированы моногликозиды апигенина и лютеолина и дигликозид апигенина. При изучении структуры гликофлавоноидов подтверждается ротационный характер изомерии с получением 2-х изомеров у С-моногликозидов и 4-х изомеров у С-дигликозида.

Впервые в растениях рода фиалка найдены халконы, флаваноны, флаванонолы; впервые охарактеризованы производные кумаринов, оксибензойных кислот.

Среди углеводов растений рода фиалки выделены и изучены водорастворимые полисахаридные комплексы (ВРПС), пектиновые вещества (ПВ), гемицеллюлозы А (ГЦ А) и Б (ГЦ Б). Изучен качественный и количественный состав выделенных комплексов. Проведен анализ структурных особенностей пектинов.

Научная новизна защищена 2 патентами: «Способ получения водорастворимых полисахаридов» из травы фиалки душистой (патент №2232774 от 20.04.04 г.), «Способ получения пектинов» из травы филаки собачьей (патент №2285536 от 20.10.2006 г.).

Впервые изучен аминокислотный и элементный состав исследуемых видов.

Установлено, что фитопрепараты, полученные из растений рода фиалка (настои, полисахаридные комплексы, выделенные из них, а также густой экстракт из травы фиалки трехцветной, сухой водорастворимый экстракт из травы фиалки полевой) являются практически нетоксичными веществами. Испытуемые фитопрепараты обладают широким спектром фармакологической активности: отхаркивающей, противовоспалительной, капилляроукрепляющей, анальгезирующей, диуретической, антибактериальной, антиоксидантной и мембраностабилизирующей.

Впервые разработана технология комплексной переработки сырья фиалки трехцветной, обеспечивающая последовательное получение густого экстракта с использованием метода вакуум-фильтрационной экстракции, суммы водорастворимых полисахаридов и пектиновых веществ.

Впервые показана возможность, обоснована целесообразность и предложена малоотходная технология переработки травы фиалки полевой, предусматривающая последовательное получение густого и сухого экстракта, а также сиропа на основе сухого водорастворимого экстракта.

Таким образом, теоретически обоснована и экспериментально подтверждена возможность расширения сырьевой базы фиалок и создания фитопрепаратов на их основе для лечения заболеваний органов дыхания.

^ Практическая значимость. Доказана идентичность состава полисахаридных комплексов изученных видов фиалок и фармакопейных видов: фиалки трехцветной и фиалки полевой. Полученные данные, а также фармакологические исследования обосновывают возможность использования травы фиалки душистой, фиалки сомнительной, фиалки собачьей, фиалки удивительной, фиалки опушенной, фиалки скальной и фиалки донской наряду с официнальными видами – фиалкой трехцветной и фиалкой полевой, что существенно расширит сырьевую базу этого ценного вида лекарственного сырья.

Разработаны методические приемы получения природных комплексов фенольных соединений и разделение их на индивидуальные компоненты.

Разработаны и апробированы методики анализа: содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин для травы фиалок, густых экстрактов, полученных из травы фиалки трехцветной и фиалки полевой; содержание полисахаридов для травы фиалок, сухого водорастворимого экстракта и сиропа на его основе.

Предложена стандартизация цельного, измельченного и порошкованного сырья в зависимости от путей его использования.

На основании морфолого-анатомического исследования впервые установлены макро- и микродиагностические признаки для определения подлинности измельченного и порошкованного сырья, которые включены в проект фармакопейной статьи.

Проведенные экспериментальные исследования фармакологической активности фитопрепаратов из растений рода фиалка аргументируют целесообразность их использования в качестве средств, предназначенных для лечения заболеваний органов дыхания, протекающих на фоне воспаления.

^ Внедрение в практику. В результате проведенных исследований разработаны и утверждены:

  • Фармакопейная статья "Фиалки трава" №42-0142-05;

  • «Инструкция по сбору и сушке травы фиалки трехцветной и фиалки полевой», утверждена Комиссией по стандартизации ВИЛАР;

  • Разработан проект ФСП «Фиалки душистой трава».

Методика качественного обнаружения флавоноидов методом ТСХ, методики количественного определения суммы флавоноидов в траве фиалки и суммы полисахаридов в траве фиалки трехцветной, фиалки полевой и фиалки душистой апробированы на базе ЗАО Фирма «Здоровье» (г. Москва); способы получения пектинов и способ получения водорастворимых полисахаридов используются в научно-исследовательском процессе кафедры фармакогнозии и ботаники Курского государственного медицинского университета и кафедры фармации Кубанского государственного медицинского университета; методика количественного определения суммы флавоноидов в траве фиалки трехцветной используется в научно-исследовательском процессе кафедры фармацевтической химии и клинической фармации ВГМА им. Н.Н. Бурденко.

Результаты исследований включены в монографию А.А. Маркаряна, Р.А. Бубенчикова [и др.] «Растения рода Фиалка – перспективные источники эффективных лекарственных и оздоровительных средств», а также в справочник «Большая Курская энциклопедия «Растительный мир» Т.3 кн. 1.

Положения, выносимые на защиту:

  • теоретическое и экспериментальное обоснование возможности расширения сырьевой базы фиалок;

  • результаты изучения химического состава растений рода фиалка;

  • разработка методов выделения и разделения фенольных соединений, установление их структуры;

  • исследования по стандартизации травы фиалки трехцветной, фиалки полевой и фиалки душистой;

  • результаты морфолого-анатомического исследования фиалки трехцветной и фиалки полевой;

  • обоснование показателей качества сырья фиалок;

  • доказательство отхаркивающей, противовоспалительной, капилляроукрепляющей, анальгезирующей, диуретической, антибактериальной, мембраностабилизирующей и антиоксидантной активности растений рода фиалка;

  • технология комплексной переработки сырья фиалки трехцветной, обеспечивающая последовательное получение густого экстракта, суммы водорастворимых полисахаридов и пектиновых веществ, а также технология получения сиропа на основе сухого водорастворимого экстракта фиалки полевой.

^ Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации были представлены и доложены, на региональной конференции, посвященной 100-летию со дня рождения заслуженного деятеля науки РСФСР, член.-корр. АМН СССР, проф. Островерхова (Курск, 2004), на Международной научно-практической конференции «Экология, окружающая среда и здоровье населения Центрального Черноземья» (Курск, 2005), на VI национальном съезде фармацевтов Украины «Досягнення та перспективи розвитку фармацевтичноï галузï Украïни» (Харьков, 2005), на 1-ой, 2-ой, 3-ей международных конференциях «Краеведение в Курском крае: прошлое и современность (Курск, 2006, 2007, 2008), на международной научно-практической конференции «Современные проблемы фитодизайна» (Белгород, 2007), на международной конференции «Кластерные подходы в современной фармации и фармацевтическом образовании (Белгород, 2008), International medizinscher congress. Program Abstracts. Euromedica Hannover – 2009 (Ганновер, 2009), на II Российском фитотерапевтическом съезде (Москва, 2010).

^ Связь задач исследования с проблемами медицинских и фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Курского государственного медицинского университета (номер государственной регистрации 01.2010.65016).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 88 научных работ, в том числе 15 в изданиях, из перечня, рекомендуемого ВАК; 1 монография, 1 справочник; получены 2 патента на изобретения.

^ Работа представляет итог исследований, выполненных автором в творческом сотрудничестве с сотрудниками кафедр фармакогнозии и ботаники; микробиологии, вирусологии и иммунологии; общей химии; НИИ экологической медицины ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет», Государственного научного центра лекарственных средств Украины сектора химии и технологии фенольных препаратов, кафедры фармации Кубанского государственного медицинского университета, кафедры фармации с курсом социальной фармации Московского медицинского университета им. И.М. Сеченова.

^ Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, четырех глав собственных исследований, заключения, выводов, списка использованной литературы и приложения. Диссертация изложена на 319 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 76 таблицами, 44 рисунками. Библиографический указатель содержит 325 источника, из которых 74 – на иностранных языках.

^ ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объекты исследований

Объектами исследований были выбраны растения рода фиалка флоры Центрального Черноземья: фиалка трехцветная (Viola tricolor L.), фиалка полевая (Viola arvensis Murr.), фиалка душистая (Viola odorata L.), фиалка сомнительная (Viola ambigua Waldst et Kit.), фиалка собачья (Viola canina L.), фиалка опушенная (Viola hirta L.), фиалка удивительная (Viola mirabilis L.), фиалка скальная (Viola rupestris F.W.Schmidt) и фиалка донская (Viola tannaitica Grosset). Наряду с этим изучению подвергались настои из исследуемых видов фиалок, которые готовили в соответствии с ГФ XI изд. в соотношении 1:10, густой экстракт из травы фиалки трехцветной, сухой водорастворимый экстракт из травы фиалки полевой, а также сироп на основе сухого водорастворимого экстракта. Были исследованы и отдельные фракции, содержащие полисахаридные комплексы, пектиновые вещества.

Сырье заготавливалось в областях Центральной России в 2002-2009 годах в период цветения растений.

Все образцы хранились в соответствии с требованиями ГОСТ 17768-90 в сухом, прохладном, хорошо проветриваемом помещении, без прямого попадания солнечных лучей в бумажных мешках в условиях лаборатории.

^ Изучение качественного состава и выделение основных групп биологически активных веществ

Нами изучен в сравнительном плане состав 9 видов из рода фиалка и установлено наличие флавоноидов, кумаринов, фенолкарбоновых кислот, углеводных производных, аминокислот, макро- и микроэлементов.

Методами хроматографии на бумаге, в тонких слоях сорбента, ВЭЖХ идентифицировано 30 соединений: 1 фенологликозид, 5 кумаринов, 9 производных фенолкарбоновых кислот, 15 флавоноидных соединений.

Впервые в исследуемых видах идентифицировано 21 соединение: в фиалке трехцветной идентифицировано 14 фенольных веществ (4-впервые); фиалке полевой – 18 (13 впервые); фиалке душистой – 20 (11 впервые); фиалке сомнительной – 21 (21 впервые); фиалке собачьей – 14 (13 впервые); фиалке опушенной – 19 (19 впервые); фиалке удивительной – 14 (12 впервые); фиалке скальной – 16 (15 впервые); фиалке донской – 4 (4 впервые).

Изучены углеводы исследуемых растений, которые представлены свободными и связанными сахарами. Из свободных сахаров обнаружены арабиноза, галактоза и глюкоза; связанные сахара содержатся в виде гликозидов и полисахаридов.

Аминокислотный анализ изученных растений показал присутствие 14 аминокислот: аланина, аргинина, аспарагиновой кислоты, валина, гистидина, глицина, глутаминовой кислоты, лейцина, лизина, метионина, тирозина, треонина, серина, фенилаланина; среди которых 7 являются незаменимыми.

Суммарное содержание свободных аминокислот в изученных растениях колебалось в пределах 1,98 мг%-25,35 мг%. Наибольшее содержание суммы свободных кислот обнаружено в траве фиалки удивительной (25,35мг%) и траве фиалки опушенной (17,10 мг%).

Результаты анализа макро- и микроэлементного состава изученных растений показывают наличие в них от 15 до 29 биоэлементов, из которых 11 являются эссенциальными.

Изученные комплексы фенольных соединений, полисахаридов, макро- и микроэлементов, аминокислот являются перспективной группой веществ для создания новых фитопрепаратов для лечения воспалительных заболеваний органов дыхания с широким спектром действия.

Для препаративного выделения фенольных соединений использовали сухое растительное сырье (надземную часть исследуемых фиалок), измельченное вальцеванием в порошок с частицами менее 1 мм. Для экстракции и выделения веществ использовали от 200,0 г до 3,0 кг изучаемого растительного сырья. При подборе экстрагента веществ фенольной природы проводили определение экстрактивных веществ по ГФ ХI издания параллельно различными растворителями: ацетоном, спиртом этиловым различной концентрации и водой.

В результате установлено, что наибольшая по качественному и количественному содержанию сумма фенольных соединений извлекается 70% ацетоном, 70% спиртом этиловым в зависимости от вида исследуемых фиалок и состава фенольных соединений. Поэтому для извлечения фенольных соединений сырье экстрагировали 70% ацетоном или 70% спиртом этиловым методом фильтрационной экстракции. Полученные извлечения упаривали под вакуумом до водного остатка, который оставляли на ночь в холодильнике.

Выпавший осадок хлорофилла и липофильных веществ отфильтровывали на складчатом фильтре и промывали водой. Концентрированные извлечения разделяли фракционированием по растворимости, для чего их обрабатывали равными количествами органических растворителей (диэтилового эфира, хлороформа, этилацетата, бутанола). Данные операции повторяли 6-8 раз для каждого растворителя. Полученные таким образом извлечения обезвоживали натрия сульфатом безводным и упаривали под вакуумом до полного удаления растворителя.

Все полученные фракции анализировали методом хроматографии на бумаге в системе растворителей: 15% кислота уксусная, 2% кислота уксусная, хлороформ-формамид, бензол – этилацетат – кислота уксусная (50:50:1), и далее вещества во фракциях разделяли методами дробной кристаллизации, колоночной и тонкослойной хроматографии на полиамиде и силикагеле, бумажной хроматографии. В итоге разработаны групповые методики выделения фенольных соединений из исследуемых видов фиалок (рис.1).

В результате проведенных исследований в индивидуальном состоянии выделено 23 фенольных соединения, из них 1 фенологликозид, 6 производных фенолкарбоновых кислот, 4 кумарина, 12 флавоноидных соединений (табл. 1).

Наряду с фенольными соединениями выделены полисахаридные комплексы из травы исследуемых видов фиалок. Для выделения водорастворимых полисахаридных комплексов использовали воздушно-сухой шрот сырья после экстракции полифенольных соединений (рис. 1). Полисахаридные комплексы получали последовательно фракционно: водорастворимые полисахаридные комплексы (ВРПС), пектиновые вещества (ПВ), гемицеллюлоза (ГЦ А и ГЦ Б). Выход полисахаридных комплексов колеблется: ВРПС от 4,0% до 12,5%, ПВ от 8,0% до 23,0% , ГЦ А от 3,9% до 9,0%, ГЦ Б от 2,5% до 4,7% (табл. 2).

^ Изучение фенольных соединений и углеводов

растений рода фиалка

Структуру выделенных фенольных соединений устанавливали, применяя инструментальные физико-химические (УФ, ИК, ПМР-спектроскопию) и химические (качественные реакции, кислотный, ферментативный гидролиз, щелочное расщепление, ацетилирование, метилирование и др.) методы исследований, а также в сравнении с достоверными образцами.

С помощью качественных реакций обнаруживали те или иные группы флавоноидных соединений, а также устанавливали различия между ними.


Таблица 1 - Фенольные соединения, выделенные из сырья исследуемых фиалок



Номер вещества


Название вещества, химическая структура


Растение, из которого выделено вещество

1

2


3
^

ГЛИКОЗИДЫ ПРОСТЫХ ФЕНОЛОВ


3.01

Арбутин

(гидрохинон-О-β-D-глюкопиранозид)

Фиалка скальная*
^

ФЕНОЛКАРБОНОВЫЕ КИСЛОТЫ


3.02

Эллаговая (дилактон

гексаоксидифеновой кислоты)

Фиалка сомнительная*

3.03

Галловая

(3,4,5-триоксибензойная)

Фиалка душистая*

3.04

Кофейная

(3,4-диоксикоричная)

Фиалка душистая, фиалка опушенная*, фиалка скальная*

3.06

Феруловая

(4-окси-3-метокси-коричная)

Фиалка полевая*, фиалка удивительная*, фиалка собачья*

3.07

Хлорогеновая

(5-О-кофеил-D-хинная)

Фиалка душистая, фиалка сомнительная*, фиалка удивительная*

3.08

Неохлорогеновая (3-О-кофеил-D-хинная)

Фиалка душистая*, фиалка скальная*

КУМАРИНЫ


3.12

Кумарин (бензо-α-пирон)

Фиалка опушенная*, фиалка сомнительная*, фиалка полевая

3.13

Герниарин (7-метоксикумарин)

Фиалка удивительная*

3.14

Скополетин (6-метокси,7-оксикумарин)

Фиалка полевая, фиалка удивительная*

3.16

Умбеллиферон (7-оксикумарин)

Фиалка полевая*, фиалка душистая*




^ Т


аблица 1(продолжение)


1

2

3

ФЛАВОНОИДЫ


3.18

Кверцетин (3,5,7, 3΄-4΄-пентаоксифлавон)

Фиалка трехцветная*, фиалка сомнительная*, фиалка удивительная*

3.20

Лютеолин (5,7, 3΄4΄-тетраоксифлавон)

Фиалка сомнительная*

3.21

Апигенин (5,7,4΄-триоксифлавон)

Фиалка трехцветная*, фиалка собачья*, фиалка сомнительная*

3.22

Хризоэриол (5,7,4΄-триокси-3΄метоксифлавон)

Фиалка сомнительная*

3.24

Витексин (8-С-син-β-D-глюкопиранозид апигенина)

Фиалка трехцветная, фиалка собачья*, фиалка сомнительная*, фиалка опушенная*

3.25

Ориентин (8-С-син-β-D-глюкопиранозид лютеолина)

Фиалка опушенная*

3.26

Цинарозид (лютеолин-7-О-β-D-глюкопиранозид)

Фиалка скальная*

3.27

Гиперозид (кверцетин-3-О-β-D-галактопиранозид)

Фиалка душистая*, фиалка опушенная*, фиалка скальная*, фиалка трехцветная*, фиалка собачья*

3.28

Виценин (8-С-β-D-глюкопиранозил-6-С-β-D-глюкопиранозид апигенина)

Фиалка скальная*, фиалка полевая

3.29

Гесперидин (5,3΄-диокси-4΄-метокси-7-О-β-D-глюкопиранозидо→ (1→6)-О-α-L-рамнопиранозид флаванона)

Фиалка полевая*, фиалка собачья*

3.30

Рутин (кверцетин-3-О-β-D-глюкопиранозидо-(1→6)-О-α-L-рамнопиранозид)

Фиалка трехцветная, фиалка собачья*, фиалка сомнительная*, фиалка полевая

3.31

Робинин (3-0- β-D-галактопиранозил-6-0- -рамнопиранозил-7-0- α - L - рамнопиранозид) кемпферола.

Фиалка опушенная*

Примечание – «*» означает, что соединение из данного растения выделено впервые.

^ Таблица 2 - Выход фракций полисахаридов из травы изученных

видов рода Фиалка

Растение рода Фиалка

Фракции полисахаридов, %

водорастворимые полисахариды

пектиновый комплекс

гемицеллю-лоза А

гемицеллю-лоза Б

Фиалка трехцветная

10,0

12,8

4,3

2,8

Фиалка полевая

5,8

9,0

5,1

3,7

Фиалка душистая

10,5

23,0

3,9

3,2

Фиалка сомнительная

7,5

12,0

6,6

3,9

Фиалка собачья

10,7

16,8

4,2

4,7

Фиалка опушенная

10,0

8,0

4,3

3,5

Фиалка удивительная

4,0

13,0

9,0

3,0

Фиалка скальная

6,5

13,5

5,0

4,0

Фиалка донская

12,5

11,0

7,5

2,5


Характер окраски продуктов цианидиновой реакции позволял предварительно отнести исследуемое соединение к флавонам или флавонолам. По продуктам деструкции в щелочной среде определяли основные элементы флавоноидных структур: кольцо А по наличию флороглюцина, кольцо В по присутствию n-оксибензойной или протокатеховой кислот. Метилирование и дезметилирование

использовали для установления замещения оксигруппами в агликонах и гликозидах. С помощью ацетилирования обнаруживали число оксигрупп в агликонах и гликозидах. Флавоноидные гликозиды гидролизовали в обычных условиях кислотами, щелочами и отдельными ферментными системами (рамнодиастазой). Проводили также ступенчатый гидролиз с выделением промежуточных продуктов деструкции гликозидов и кислотный гидролиз по Киллиани. В УФ-спектральном анализе флавоноидов применяли ионизирующие и комплексообразующие реактивы.

Фенологликозиды. Вещество 3.01 по качественным реакциям, хроматографической подвижности, физико-химическим характеристикам было охарактеризовано как О-β-D-глюкопиранозид гидрохинона или арбутин (табл.3).

Производные галловой кислоты. Вещества 3.02-3.03 на основании качественных реакций, результатов химических превращений, хроматографического анализа, физико-химических характеристик были отнесены к производным галловой кислоты. В результате проведенных
^

Таблица 3 - Физико-химические свойства веществ, выделенных из сырья исследуемых фиалок



Номер вещества


Название вещества


Общая формула


T пл., ˚С


Молеку-лярная

масса

Окраска веществ в УФ-свете



Величина Rf

До проявления

После проявления

Парами аммиака

Спиртовым

раствором

NaOH

Раствором циркония хлорокиси

1

2


3

4

5

6

7

8

9

10
^

ПРОСТЫЕ ФЕНОЛЫ


3.01

Арбутин

(гидрохинон-О-β-D-глюкопиранозид)

С12Н16О7

195-197

272,26

бледно-фиолетовая

-

-

ярко-фиолето-вая

0,85Б;

0,90З;

0,89И.
^

ФЕНОЛКАРБОНОВЫЕ КИСЛОТЫ


3.02

Эллаговая (дилактон гексаоксидифеновой кислоты)

С14Н6О8

360 разл.

302,00

сиреневая

желтая




желтая

0,25А; 0,10Б.

3.03

Галловая

(3,4,5-триоксибензойная)

С7Н6О5

254-256

170,00

темная

-

-

синяя

0,62А;

0,55Е.

3.04

Кофейная

(3,4-диоксикоричная)

С9 Н8 О4

193-195

184,30

светло-голубая

ярко-

голубая

ярко-

голубая

голубая

0,82А; 0,41Б;

0,26В.

3.06

Феруловая

(4-окси-3-метокси-коричная)

С10 Н10 О4

167-169

194,19

голубовато-фиолетовая

ярко-голубовато-фиолетовая

ярко-голубоватофиолетовая

голубая

0,83А;

0,55Б;

0,33В.

3.07

Хлорогеновая

(5-О-кофеил-D-хинная)

С16 Н18 О9

203-205

353,08

голубая

зеленовато-голубая

зеленовато-голубая

голубая

0,65А;

0,72Б;

0,70В.

3.08

Неохлорогеновая

(3-0-кофеил- D-хинная)

С16 Н18 О9

аморфн.

354,00

голубая

голубая

зеленовато-голубая

голубая

0,72В.
КУМАРИНЫ

3.12

Кумарин

(бензо-α-пирон)

С9 Н6 О2

67-68

146,89

-

-

зелено-

ватая

-

0,80Г;

0,93Ж.

3.13

Герниарин

(7-метоксикумарин)

С10 Н8 О3

117-118

173,40

сиреневая

ярко-сиреневая

ярко-сиреневая

-

0,88Ж.

3.14

Скополетин

(6-метокси,7-оксикумарин)

С10 Н8 О4

204-205

196,60

голубая

ярко-

голубая

ярко-

голубая

-

0,50Б; 0,20Г;

0,60Ж.

3.16

Умбеллиферон

(7-оксикумарин)

С9 Н6 О3

233-234

162,88

голубая

ярко-

голубая

ярко-

голубая

голубая

0,65Б; 0,32Г;

0,25Ж.

ФЛАВОНОИДЫ


3.18

Кверцетин (3,5,7, 3΄-4΄-пентаоксифлавон)

С15 Н10 О7

310-312

302,00

желтая

ярко-желтая

желтая

-

0,68А; 0,10Б;

0,12Е.




^ Таблица 3 (продолжение)

1

2


3

4

5

6

7

8

9

10

3.20

Лютеолин (5,7, 3΄-4΄-тетраоксифлавон)

С15 Н10 О6

328-330

286,24

темная

оранжевая

-

желтая

0,22Е.

3.21

Апигенин

(5,7,4΄-триоксифлавон)

С15 Н10 О5

340-345

270,24

темная

зеленая

-

желтая

0,82А;

0,18Е.

3.22

Хризоэриол (5,7,4΄-триокси-3΄-метоксифлавон)

С16Н12 О6

330-331

300,00

темная

-

-

желтая

0,83 Л.

3.24

Витексин (8-С-син-β-D-глюкопиранозид апигенина)

С21 Н20О10

263-265

432,20

темная

зеленая

-

желтая

0,20Б;

0,35Е.

3.25

Ориентин (8-С-син-β-D-глюкопиранозид лютеолина)

С21 Н20О11

260-262

448,00

темная

оранжевая

-

желтая

0,24Б;

0,33Е.

3.26

Цинарозид (лютеолин-7-

О-β-D-глюкопиранозид)

С12 Н20О11

256-258

448,00

темно-коричневая

оранжевая

-

желтая

0,24 Е.

3.27

Гиперозид (кверцетин-3-О-

β-D-галактопиранозид)

С21Н20О12

235-237

464,00

темно-желтая

-

-

желтая

0,50Б.

3.28

Виценин (8-С-β-D-глюкопиранозил-6-С-β-D-глюкопиранозид апигенина)

С27 Н30О15

232-234

594,00

темная

желто-

зеленая

желтая

желтая

0,60Б.

3.29

Гесперидин (5,3΄-диокси-4΄-метокси-7-О-β-D-глюкопи-ранозидо→ (1→6)-О-α-L-рамнопиранозид флаванона)

С28Н34О15

260-261

610,58

-

зеленовато-желтая

салатная

зеленовато-желтая

0,50А;

0,75Б.

3.30

Рутин (кверцетин-3-О-β-D-глюкопиранозидо-(1→6)-О-α-L-рамнопиранозид)

С27 Н30О16

188-190

610,52

темно-бурая

оранжевая

желто-оранжевая

желтая

0,70А;

0,55Б.

3.31

Робинин (3-0-В-D-галактопиранозил-6-0-L-рамнопиранозил-7-0--L-рамнопиранозид) кемпферола

С33Н40О19

192-194

740,15

темная

желто-

зеленая

-

желтая

0,31 А;

0,79 Б;

0,88 В.

П


римечание
: Системы растворителей для хроматографирования:

А – н. бутанол- кислота уксусная - вода (4:1:2) - БХ;

Б – 15% раствор кислоты уксусной - БХ;

В – 2% раствор кислоты уксусной - БХ;

Г – бензол-этилацетат (2:1) – ТСХ («Silufоl»);

Д – бензол-этилацетат - кислота уксусная (50:50:1) - БХ;

Е – 30% раствор кислоты уксусной - БХ;

Ж – хлороформ-формамид - БХ;

З – этилацетат- кислота муравьиная - вода (3:1:1) - БХ;

И – 60% раствор кислоты уксусной – ТСХ («Silufоl»);

К – хлороформ-спирт этиловый - вода (100:50:2) - ТСХ («Silufоl»);

Л – н.бутанол- кислота уксусная - вода (4:1:5) – БХ.


физико-химических исследований и в сравнении с достоверными образцами вещество 3.02 идентифицировано как дилактон гексаоксидифеновой кислоты или эллаговая кислота, а вещество 3.03 как 3,4,5-триоксибензойная или галловая кислота.

Оксикоричные кислоты. Вещества 3.04, 3.06, 3.07, 3.08 по флюоресценции пятен на хроматограммах в УФ-свете, хроматографической подвижности, качественным цветным реакциям с хлоридом железа, диазотированной сульфаниловой кислотой и бромкрезоловым зеленым были отнесены к производным коричной кислоты. Данные УФ-спектров подтверждают предположение, что исследуемые соединения являются производными коричной кислоты, имеющими максимумы поглощения в области 235-245 и 296-325 нм. Продукты щелочного гидролиза вещества 3.04 идентифицировали с протокатеховой кислотой, вещества 3.06 с ванилиновой кислотой, веществ 3.07 и 3.08 с кофейной и D-хинной кислотой. Для установления места присоединения кофейной и D-хинной кислот в веществах

3.07 и 3.08 проводили лактонизацию этих веществ в ледяной кислоте уксусной. При этом образование лактона происходило только в присутствии вещества 3.08, вещество 3.07 оставалось без изменений. Следовательно в молекуле вещества 3.07 оксигруппа D-хинной кислоты замещена остатком кофейной кислоты в С-5 положении, а вещества 3.08 – в положении С-3. Таким образом, исследуемые соединения охарактеризованы как: 3.04 - 3,4-диоксикоричная или кофейная кислота, 3.06 - 4-окси-3-метокси-коричная или феруловая кислота, 3.07 - 5-О-кофеил-D- хинная или хлорогеновая кислота, 3.08 - 3-0-кофеил-D-хинная или неохлорогеновая кислота.

Кумарины. Вещества 3.12, 3.13, 3.14, 3.16 по флуоресценции пятен на хроматограммах в УФ-свете, хроматографической подвижности, качественным реакциям отнесены к кумаринам. Кумариновая природа исследуемых соединений подтверждена также их деструкцией кислотой йодистоводородной в среде жидкого фенола. Данные УФ-, ИК-спектров, продуктов химических превращений, отсутствие депрессии температуры плавления в смешанных пробах с достоверными образцами дали основание охарактеризовать вещество

3.12 как бензо-α-пирон или кумарин, вещество 3.13 - 7-метоксикумарин или герниарин, вещество 3.14 – 6-метокси-7-оксикумарин или скополетин, вещество 3.16 – 7-оксикумарин или умбеллиферон.

Флавоноидные агликоны. Вещества 3.18, 3.20, 3.21, 3.22 дают положительную цианидиновую реакцию по Брианту, это позволяет отнести их к флавоноидным агликонам. При проведении цианидиновой реакции у вещества 3.18 октанольный слой окрашивается в красный цвет, что характерно для флавонолов, а у веществ 3.20, 3.21, 3.22 в розовый цвет, характеризующий флавоны. Флавоноидная природа подтверждается также ИК-спектрами, в которых отмечаются полосы поглощения в области 3385-3200 см-1 (фенольные оксигруппы), 1639-1665 см-1 (карбоксильная группа γ-пирона), 1615, 1510 см-1 (колебания ароматических колец). Положение свободных оксигрупп доказывали на основании данных прямой и дифференциальной УФ-спектроскопии, применяя ионизирующие и комплексообразующие реактивы. Продуктами щелочной деструкции веществ 3.18 и 3.20 являются флороглюцин и протокатеховая кислота, вещества 3.21 – флороглюцин и n-оксибензойная кислота, вещества 3.22 – флороглюцин и изовалериановая кислота.

Ацетильные и метильные производные исследуемых веществ полностью совпали по физико-химическим свойствам с соответствующими производными кверцетина, апигенина, лютеолина, хризоэриола. При дезметилировании вещества 3.22 образуется вещество 3.20 (лютеолин).

В результате изучения физико-химических свойств исходных веществ и их производных, а также в сравнении с достоверными образцами выделенные соединения идентифицированы как: вещество 3.18 – 3,5,7,3΄-4΄-пентаоксифлавон или кверцетин, вещество 3.20 – 5,7,3΄-4΄-тетраоксифлавон или лютеолин, вещество 3.21 - 5,7,4΄-триоксифлавон или апигенин, вещество 3.22 – 5,7,4΄-триокси-3΄-метоксифлавон или хризоэриол. Анализируя распространение флавоноидных агликонов в растениях рода фиалка, отмечено, что наиболее часто встречается кверцетин, он содержится во всех исследованных видах, а наиболее редко хризоэриол, он содержится только в фиалке сомнительной.

Флавоноидные гликозиды. Вещества 3.24, 3.25, 3.26, 3.27, 3.28, 3.29, 3.30, 3.31 на основании отрицательной цианидиновой пробы в модификации Брианта, результатов кислотного гидролиза отнесены к гликозидам флавоноидов. В дифференциальном ИК-спектре этих соединений, кроме полос поглощения, характеризующих их флавоноидную природу, обнаружены три полосы в области 1100-1010 см-1 , указывающие на наличие в их структуре углеводов в пиранозной форме, полосы поглощения в области 900-880 см-1, характеризующую β-конфигурацию гликозидной связи между углеводом и агликоном.

Количественным кислотным гидролизом, сравнением УФ-спектров гликозидов и их агликонов, данными молекулярной массы гликозиды флавоноидов разделились на моно-, би- и дигликозиды. При изучении конечных продуктов и динамики гидролиза устанавливали, что большинство гликозидов сравнительно легко гидролизуются, что позволило отнести их к О-гликозидами, часть же веществ в обычных условиях гидролиза не расщепляются, что было основанием отнести их к С-гликозидам.

О-гликозиды распределились на 3-О- гликозиды и 7-О-гликозиды. 3-О-гликозиды представлены флавонолами и разделились на моногликозиды (вещество 3.27) и биозиды (вещество 3.30). В продуктах кислотного гидролиза вещества 3.27 обнаружили кверцетин и D-галактозу, а вещества 3.30 -кверцетин, D-глюкозу и L-рамнозу. Для выяснения последовательности присоединения моносахаридов в веществе 3.30 провели мягкий ступенчатый гидролиз 0,5% кислотой хлористоводородной в 50% спирте этиловом. В продуктах реакции промежуточного гликозида не обнаружили, а нашли кверцетин (вещество 3.18) и рутинозу. Следовательно, с агликоном связана D-глюкоза, L-рамноза является терминальным сахаром. Ферментативный гидролиз вещества 3.30 рамнодиастазой вызывал отщепление углеводного остатка, что указывает на 1-6 порядок связи между сахарами. На основании проведенных исследований вещество 3.27 можно охарактеризовать как кверцетин-3-О-β-D-галактопиранозид или гиперозид, а вещество 3.30 - кверцетин-3-О-β-D-глюкопиранозид-(1→6)-О-α-L-рамнопиранозид или рутин). Рутин является общим и доминирующим соединением растений рода фиалка.

К 7-О-гликозидам отнесены вещества 3.26 и 3.29, которые представлены флавонами (вещество 3.26) и флаванонами (вещество 3.29). В продуктах кислотного гидролиза вещества 3.26 обнаружили лютеолин и D-глюкозу, а вещества 3.29 гесперитин, D-глюкозу и L-рамнозу. Ферментативный гидролиз вещества 3.29 проводили рамнодиастазой параллельно с веществом 3.30 (рутином). В результате устанавливали, что углеводный компонент вещества 3.29 представлен рутинозой. Таким образом, вещество 3.26 идентифицировали как лютеолин-7-О-β- D-глюкопиранозид или цинарозид, вещество 3.29 - 5,3΄-диокси-4΄-метокси-7-О-β-D-глюкопиранозидо → (1→6)-О-α-L-рамнопиранозид флаванона или гесперидин.

Вещество 3.31 является 3-(О-β-D-галактопиранозид-7-О-L-α- рамнопиранозидом) кемпферола или робинином.

Вещества 3.24, 3.25, 3.28 по отношению к кислотному гидролизу отнесены к С-гликозидам. Кислотный гидролиз данных соединений в обычных условиях приводил к образованию 2-х изомеров у веществ 3.24 и 3.25 и 4-х у вещества 3.28 и сахар при этом в гидролизате не обнаруживали. В продуктах кислотного гидролиза по Киллиани обнаружили апигенин у веществ 3.24 и 3.28 и лютеолин у вещества 3.25. В качестве сахарного компонента во всех случаях идентифицировали D-глюкозу. На основании проведенных исследований вещества 3.24 и 3.25 отнесены к С-моногликозидам и охарактеризованы как: вещество 3.24 - 8-С-син-β-D-глюкопиранозид апигенина или витексин, вещество 3.25 - 8-С-син-β-D-глюкопиранозид лютеолина или ориентин. Вещество 3.28 отнесено к С-дигликозидам и охарактеризовано как 8-С-β-D-глюкопиранозил-6-С-β-D-глюкопиранозид апигенина или виценин.

Изучен качественный и количественный моносахаридный состав полисахаридных комплексов растений рода фиалка. Для анализа полисахаридных комплексов их подвергали гидролизу раствором кислоты серной (1 моль/л). Хроматографически в гидролизатах водорастворимых полисахаридов обнаружили от 6 до 8 веществ моносахаридного характера, из которых идентифицировали арабинозу, галактозу, глюкозу, ксилозу, рамнозу, глюкуроновую и галактуроновую кислоту; в гидролизатах пектиновых веществ идентифицировали 5 моносахаридов: арабинозу, галактозу, рамнозу, ксилозу и галактуроновую кислоты; в гидролизатах ГЦА и ГЦБ - 4 моносахарида: рамнозу, ксилозу, арабинозу, галактозу. Содержание моносахаридов определяли денситометрически после хроматографии гидролизатов в тонких слоях сорбента в системе растворителей: н-бутанол - кислота уксусная - вода в соотношении 3:1:1. Установлено, что в водорастворимых полисахаридах преобладающими являются глюкоза от 4,0% (фиалка душистая) до 9,1% (фиалка трехцветная), арабиноза от 9,5% (фиалка полевая) до 29,7% (фиалка собачья), галактоза от 5,2% (фиалка полевая) до 28,4% (фиалка опушенная). Основу пектиновых веществ составляет галактуроновая кислота – от 68,4% (фиалка душистая) до 89,2% (фиалка опушенная). В гемицеллюлозе А и Б преобладающим моносахаридом является ксилоза от 5,8 % (фиалка сомнительная) до 8,6% (фиалка скальная) и от 6,8% (фиалка душистая) до 8,7% (фиалка опушенная), что указывает на наличие полисахаридов типа ксилана.

Проведено определение функциональных групп пектиновых веществ титриметрическим методом. Содержание свободных карбоксильных групп в исследуемых пектиновых веществах колеблется от 0,43% до 8,17%, метоксилированных карбоксильных групп - от 0,60% до 6,54%, метоксильных групп - от 0,47% до 4,51%. Пектиновые вещества фиалки трехцветной, фиалки полевой, фиалки собачьей, фиалки удивительной характеризуются невысокой степенью этерификации (<50%), а пектиновые вещества фиалки донской, фиалки опушенной, фиалки скальной относятся к высоко этерифицированным соединениям.

Высокое содержание свободных карбоксильных групп у пектиновых веществ фиалки трехцветной, фиалки полевой, фиалки душистой, фиалки собачьей, фиалки удивительной говорит об их комплексообразующей способности и возможности рекомендации их в качестве детоксикантов.

^ Разработка нормативной документации на сырье фиалок

Существующая ФС «Трава фиалки» (Государственная…, 1989) не удовлетворяет современным требованиям, предъявляемым к нормативной документации на растительное сырье, т.к. в ней отсутствуют методики качественного и количественного определения основных групп биологически активных веществ, что не позволяет дать объективную оценку качества сырья.

Основными группами биологически активных веществ травы фиалок являются флавоноиды и полисахариды, поэтому стандартизацию сырья необходимо проводить по их содержанию.

Для качественного обнаружения флавоноидов в исследуемых видах разработана методика хроматографии в тонком слое сорбента на пластинках «Sorbfil» [ПТСХ–АФ-А-УФ]. В качестве подвижной фазы, обеспечивающей наилучшее разделение суммы флавоноидов растений рода фиалка, экспериментально подобрана система растворителей: этилацетат- кислота муравьиная-вода (70:15:15). В результате проведенных исследований установлено, что на хроматограмме должно быть видно не менее 5 основных зон: - одна на уровне ГСО рутина, остальные с Rs около 0,28, Rs около 0,72, Rs около 1,26, Rs около 1,38, имеющие темную флуоресценцию в УФ-свете. Данная методика внесена в раздел «Хроматография» проекта ФС.

Для количественного определения флавоноидов разработана спектрофотометрическая методика определения суммы флавоноидов непосредственно в извлечениях из сырья. В основу данной методики положена реакция комплексообразования с алюминия хлоридом в сочетании со спектрофотометрическим дифференциальным способом определения оптической плотности комплексов. Это позволяет проводить непосредственное спектрофотометрирование комплексов флавоноидов с алюминия хлоридом без дополнительных стадий очистки. При подборе экстрагента и степени измельчения сырья установлено, что оптимальным растворителем, обеспечивающим максимальный выход флавоноидов из сырья фиалок, является 70% спирт этиловый, степень измельчения сырья 1-2 мм. Для извлечения флавоноидов нами использована экстракция до наступления равновесия, максимальный выход флавоноидов достигается через 45 минут с последующим наступлением равновесия. В составе суммы флавоноидов фиалок содержатся гликозиды кверцетина, апигенина, лютеолина, преобладающим среди них является рутин. Спектры поглощения спиртовых извлечений из сырья фиалок с алюминия хлоридом и рутина с алюминия хлоридом совпадают, при этом максимум поглощения находится при длине волны 410 нм. Устойчивое окрашивание извлечений из сырья фиалок наступает через 30 минут и сохраняется в течении 2-х часов, что достаточно для проведения анализа. Описанные выше исследования позволили разработать методику количественного определения суммы флавоноидов в сырье фиалок в пересчете на ГСО рутин. Методика валидирована по показателям: линейность (у=851,746±0,0125, R2=0,9998), повторяемость (Eотн.– 2,72%), воспроизводимость (RSD=3,20%), правильность (среднее значение выхода 99,67%).

Предложенной методикой проанализировано по 5 партий сырья фиалки трехцветной, фиалки полевой и фиалки душистой, а также сырье всех исследуемых фиалок. Содержание суммы флавоноидов в траве фиалок находится в пределах 1,15-3,21% у травы фиалки трехцветной и фиалки полевой и 1,84-2,74 % у травы фиалки душистой. В траве других исследованных фиалок содержание суммы флавоноидов колеблется от 0,61% до 2,73%.

Установлена норма содержания суммы флавоноидов в траве фиалки трехцветной и фиалки полевой не менее 1,0%.

Для количественного определения водорастворимых полисахаридов использован гравиметрический метод, основанный на экстракции суммы полисахаридов из сырья горячей водой с последующим осаждением их 96% спиртом этиловым. Определены оптимальные условия извлечения и осаждения полисахаридов: степень измельчения сырья – 2 мм, нагревание в течение 30 минут, трехкратная экстракция, соотношение сырья и экстрагента 1:10, 4-кратное количество 95% спирта этилового по отношению к извлечению. Ошибка единичного определения с 95% вероятностью не превышает 4,72%. Установлено, что содержание суммы полисахаридов в траве фиалки трехцветной и фиалке полевой колеблется от 8,4% до 14,5%, а в траве фиалки душистой от 10,5% до 14,5%. На основании полученных данных установлена норма содержания суммы полисахаридов в траве фиалки трехцветной и фиалки полевой, не менее 8,0%.

Разработанные методики количественного определения суммы флавоноидов и суммы полисахаридов введены в новый раздел проекта фармакопейной статьи «Количественное определение».

Впервые осуществлен дифференцированный подход к стандартизации лекарственного сырья фиалки трехцветной и фиалки полевой в зависимости от путей его использования. Показатель «Содержание суммы флавоноидов» распространяется на фиалки траву, предназначенную для получения водно-спиртовых экстрактов; показатель «Суммы полисахаридов» распространяется на траву фиалки, предназначенную для получения водорастворимых экстрактов; показатель «Содержание экстрактивных веществ, извлекаемых водой», распространяется на траву фиалок, предназначенную для получения настоев.

Для установления доброкачественности сырья фиалок определены числовые показатели качества сырья: влажность, зола общая, зола не растворимая в 10% растворе кислоты хлористоводородной, содержание суммы экстрактивных веществ, извлекаемых водой, пожелтевших листьев и стеблей, других частей растения, содержание органической и минеральной примесей, внесенные в проект фармакопейной статьи.

В новый проект Фармакопейной статьи внесены существенные изменения и дополнения в разделы «Внешние признаки» и «Микроскопия». Уточнены и дополнены внешние признаки цельного и измельченного сырья, микродиагностические признаки цельного сырья, впервые разработаны внешние признаки порошкованного сырья, микродиагностические признаки измельченного и порошкованного сырья.

Кроме того, по новым требованиям в проект ФС внесен раздел «Микробиологическая чистота».

Изучение сроков годности сырья фиалок, показало что хранение травы в сухом проветриваемом помещении, при температуре 18-20°С в течение 3,5 лет практически не влияет на содержание основных групп биологически активных веществ, что позволило установить срок годности сырья 3 года.

В результате проведенных исследований разработан проект ФС «Фиалки трава» для фиалки трехцветной и фиалки полевой (табл. 4).

^ Таблица 4 - Требования и нормы на сырье «Фиалки трава», включенные в проект ФС

Разделы Фармакопейной статьи

ФС 62 ГФ XI

Проект ФС «Фиалки трава»

1

2

3

Внешние признаки

  1. Цельное сырье

  2. Измельченное сырье

1. Цельное сырье

2. Измельченное сырье

3. Порошок

Микроскопия

1. Цельное сырье

1. Цельное сырье

2. Измельченное сырье




оставить комментарий
страница1/3
Дата15.10.2011
Размер0.68 Mb.
ТипАвтореферат, Образовательные материалы
Добавить документ в свой блог или на сайт

страницы:   1   2   3
плохо
  1
отлично
  1
Ваша оценка:
Разместите кнопку на своём сайте или блоге:
rudocs.exdat.com

Загрузка...
База данных защищена авторским правом ©exdat 2000-2017
При копировании материала укажите ссылку
обратиться к администрации
Анализ
Справочники
Сценарии
Рефераты
Курсовые работы
Авторефераты
Программы
Методички
Документы
Понятия

опубликовать
Загрузка...
Документы

Рейтинг@Mail.ru
наверх